Fő különbség - Papír vs vékony réteg vs oszlopkromatográfia
A papírkromatográfia, a vékonyréteg-kromatográfia és az oszlopkromatográfia háromféle kromatográfiai módszer. A papírkromatográfia, a vékonyréteg-kromatográfia és az oszlopkromatográfia közötti fő különbség a kromatográfiás technikában alkalmazott állófázis típusán alapul. A papírkromatográfia során cellulózpapírt használnak állófázisukként, a Vékonyréteg-kromatográfiában állófázisként alumínium-oxidot vagy szilikagélt használnak, míg az oszlopkromatográfiában állófázisként egy megfelelő mátrixanyaggal töltött oszlopot használnak.
A biomolekulák, például fehérjék és szénhidrátok szétválasztása és azonosítása során a kromatográfia fontos alkalmazott biofizikai technika. A kromatográfia szétválasztja a vegyületeket oldhatóságuk, méretük és töltésük alapján. Az elválasztási mechanizmus alapján a kromatográfia olyan mechanizmusokat használ, mint az ioncsere, az abszorpció, a megoszlás és a méret kizárása, és három kromatográfiai módszer létezik; mégpedig papír, vékony réteg és oszlopkromatográfia. A papírkromatográfia a vegyület szilárd folyadék adszorpcióján és oldhatóságán alapul, és állófázisként cellulózpapírt használ. A vékonyréteg-kromatográfia a molekulák szilárd-folyékony adszorpcióján alapul. Helyhez kötött fázisa van, amelyet tipikusan alumínium-oxidból vagy szilikagélből készítenek, és a mozgó fázist, amely az oldószer. Az oszlopkromatográfia egy olyan mátrixszal töltött oszlopot használ, amelyet főként méretük, affinitásuk vagy töltésük alapján választanak el a molekuláktól.
TARTALOM
1. Áttekintés Kromatográfiás és Legfontosabb különbség
2. Mi Papírkromatográfia
3. Mi vékonyréteg kromatográfia
4. Mi oszlopkrómatografálása
5. hasonlóságok között papír, vékony réteg és oszlopkrómatografálása
6. Egymás melletti összehasonlítás - Papír vs vékonyréteg vs Oszlopkromatográfia táblázatos formában
7. Összefoglalás
Mi az a papírkromatográfia?
A papírkromatográfia a legegyszerűbb típusú kromatográfia, amelyet nem használnak átfogó kutatásokhoz. Elsősorban hallgatói laboratóriumokban használják biomolekulák, például aminosavak és szénhidrátok azonosítására a keverékekben. A papírkromatográfia egy állófázist használ, amelyet cellulózpapír vagy Whatman szűrőpapír felhasználásával állítanak elő, és egy mozgófázist, amelyet általában szerves oldószerek, például n-butanol stb. Felhasználásával állítanak elő. Az állófázis vízzel telített, így az állófázis folyékony. Tehát, amikor a vegyületeket észrevesszük és hagyjuk futni a mozgófázis jelenlétében, a vegyületek oldhatóságától függően, elválasztjuk őket. Így a kromatogram kifejlesztése után festést lehet végezni az egyes vegyületek hosszának meghatározása céljából. Ezáltal kiszámítható a retenciós tényező.
01. ábra: Papírkromatográfia
A papír-kromatográfia tovább besorolható növekvő papír-kromatográfiának és csökkenő papír-kromatográfiának a futó oldószer irányától függően.
Mi az a vékony rétegű kromatográfia?
A vékonyréteg-kromatográfia vagy a vékonyréteg-kromatográfia általánosan alkalmazott technika a keverékben jelen lévő különböző aminosavak vagy a fehérjék azonosítására. Az elválasztás technikája a szilárd-folyékony adszorpción alapul. A vékonyréteg-kromatográfia során alumínium-oxidból vagy szilikagélből készült lemezt használunk állófázisként. Az oldószerelegy az igény függvényében változik, és szerves vegyületek, például n-butanol, ecetsav és víz különböző kombinációit használhatja az oldószer előállításához. Az elválasztandó vegyületeket a lemezre foltozzuk, és az oldószerelegybe merítjük. Amint az oldószer felfelé halad a lemez által adott kapilláris hatás alapján, a lemezen foltos vegyületek az oldószerben való oldhatóságuktól függően is mozognak.
02. ábra: Vékonyréteg-kromatográfia
A foltok kimutatását a kromatogram után különböző festési eljárásokkal végezzük. Néhányan ninhidrin festést alkalmaznak, amely meglehetősen mérgező módszer a festésre. A modern vékonyréteg-kromatogramok fluoreszcencia technikákat alkalmaznak a kromatogram megtekintésére a futtatás után. A megtett távolságoktól függően kiszámítható az egyes vegyületek retenciós ideje. Ez felhasználható az alkalmazott keverék alapján elválasztott vegyület típusának azonosítására. A vékonyréteg-kromatográfiát elsősorban a fehérje-keverékben lévő aminosavak azonosítására és a keverékben jelen lévő különféle monoszacharidok elkülönítésére használják.
Mi az oszlopkromatográfia?
Az oszlopkromatográfia egy tág kifejezés, amelyet számos olyan kromatográfiai technika leírására használnak, amelyek oszlopon alapuló elválasztási módszert alkalmaznak. Az oszlopkromatográfiában fizikai oszlopot használunk egy csomagolóanyaggal a vegyületek elválasztására. Az elválasztás a vegyületek különböző fizikai tulajdonságain alapulhat. Ezek a tulajdonságok lehetnek töltés, méret, 3D konformáció és megkötő képesség stb. Így a mátrixanyaggal megtöltött oszlop állófázisként, az oszlopra felvitt mosópuffer pedig mozgófázisként működik.
Ha a molekulákat a méret alapján választják el, a csomagolóanyagot úgy csomagolják, hogy pórusokat hagyjon a vegyületek számára. Így először azok a nagyobb molekulák eluálódnak, amelyek nem tudnak átfolyni a pórusokon, míg a kisebb molekulák eluálása sokkal hosszabb időt vesz igénybe.
03. ábra: Oszlopkromatográfia
Ha a molekulákat töltésük alapján szétválasztjuk, az állófázis vagy aniont vagy kationcserélőt tartalmaz, amelyhez a vegyületek a töltésük alapján vonzódni fognak. Így a mosási lépés során a nem kötött vegyületek eluálódnak. Az elúciós puffer hozzáadása után a megkötött töltött vegyületek eluálódnak. Ezen eluensek kimutatása többnyire spektrofotometriás technikákon alapszik.
Milyen hasonlóságok vannak a vékony papírréteg és az oszlopkromatográfia között?
- Az összes papír vékony réteg és oszlop kromatográfia három módszert alkalmaz a biomolekulák, például aminosavak, fehérjék és szénhidrátok elválasztására.
- A papír vékony rétegű és oszlopos kromatográfiás technikáinak van egy mozgó és egy álló fázisa.
- A papír vékony rétegű és oszlopos kromatográfiás technikái biofizikai mechanizmusokat alkalmaznak az elválasztáshoz.
Mi a különbség a vékony papírréteg és az oszlopkromatográfia között?
Különböző cikk a táblázat előtt
Papír vs vékony réteg vs oszlop kromatográfia |
|
| Papírkromatográfia | A papírkromatográfia olyan kromatográfiai módszer, amelyet a vegyületek szétválasztására használnak a vegyület folyadék-folyadék adszorpciója és oldhatósága alapján. Stacionáris fázisaként cellulózpapírt használ. |
| Vékonyréteg-kromatográfia | A vékonyréteg-kromatográfia egy másik kromatográfiai technika, amely a molekulák szilárd-folyékony adszorpcióján alapul. Ennek alumínium-oxidból vagy szilikagélből álló álló fázisa van, és mozgó fázisként egy oldószer, amely az oldószer. |
| Oszlopkromatográfia | Az oszlopkromatográfia egy olyan mátrixszal töltött oszlopot használ, amelyet a molekulák szétválasztására használnak, főként méretük, affinitásuk vagy töltésük alapján. |
| Helyhez kötött fázis | |
| Papírkromatográfia | A Whatman nitrocellulózból készült papírt használjuk állófázisként a papírkromatográfiában. |
| Vékonyréteg-kromatográfia | A vékonyréteg-kromatográfia állófázisaként alumínium-oxidot vagy szilikagélt használnak. |
| Oszlopkromatográfia | Megfelelő csomagolóanyaggal töltött oszlopot használunk állófázisként az oszlopkromatográfiában. |
| Mobil fázis | |
| Papírkromatográfia | A futó oldószer a papírkromatográfia mozgófázisa. |
| Vékonyréteg-kromatográfia | A futó oldószer a vékonyréteg-kromatográfia mozgófázisa. |
| Oszlopkromatográfia | A mosópuffer az oszlopkromatográfia mozgófázisa. |
| Az elválasztáshoz használt mechanizmusok | |
| Papírkromatográfia | A papírkromatográfia szilárd folyadék abszorpción alapul. |
| Vékonyréteg-kromatográfia | A vékonyréteg-kromatográfia szilárd folyadék abszorpción alapul. |
| Oszlopkromatográfia | Az oszlopkromatográfia a méretkizáráson, a töltésen és az alakon alapul. |
| Elúciós puffer | |
| Papírkromatográfia | Papírkromatográfia nem igényli. |
| Vékonyréteg-kromatográfia | Vékonyréteg-kromatográfiához nem szükséges. |
| Oszlopkromatográfia | Oszlopkromatográfia esetén szükséges. |
| Érzékelés | |
| Papírkromatográfia | Festés és a retenciós tényező meghatározása. |
| Vékonyréteg-kromatográfia | Festés és a retenciós tényező meghatározása. |
| Oszlopkromatográfia | Spektrofotometriás meghatározás. |
Összegzés - Papír vékony réteg vs oszlopkromatográfia
A papírkromatográfia, a vékonyréteg-kromatográfia és az oszlopkromatográfia a biomolekulák, például fehérjék, aminosavak és szénhidrátok (főleg monoszacharidok) szétválasztására szolgáló elválasztási technika. A papírkromatográfia cellulózpapírt használ állófázisként, és az elválasztás mechanizmusa szilárd-folyékony adszorpción alapul. A TLC szilárd-folyékony adszorpciós mechanizmusokat is alkalmaz. A molekulákat az állófázisban választjuk el, a mozgó fázisban való oldhatóságuktól függően. Az oszlopkromatográfia fizikai tulajdonságokat, például méretet, alakot, töltést és a vegyület molekulatömegét használja a szétválasztáshoz. A mátrixanyaggal töltött oszlop állófázisként, míg a mosópuffer oldószerfázisként működik. Ez a különbség a vékony papírréteg és az oszlopkromatográfia között.
