Fő különbség - gél halmozása vs elválasztó gél
Az SDS-PAGE technika magyarázatában a halmozó gél és az elválasztó gél kifejezéseket használjuk. Az SDS-PAGE vagy a nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gél elektroforézis olyan laboratóriumi technika, amelyet a fehérjemolekulák molekulatömegük alapján történő szétválasztására használnak. A technika mögött az az elmélet áll, hogy a különböző molekulatömegű fehérjék eltérő migrációs sebességet mutatnak; az alacsony molekulatömegű molekulák gyorsabban, míg a nagy molekulatömegűek lassan. A migrációs közeg egy gél. Kétféle gél van, amelyeket egymásra rakódó gélnek és elválasztó gélnek neveznek. A legfontosabb különbség a halmozó gél és az elválasztó gél között az, hogy a rakó gél pH-ja 6,8, míg az elválasztó gél pH-ja 8,8.
TARTALOM
1. Áttekintés és a legfontosabb különbség
2. Mi a gél felrakása
3. Mi a gél elválasztása
4. Kapcsolat a gél halmozódása és a gél elválasztása között
5. Egymás melletti összehasonlítás - Gél egymásra helyezése és elválasztó gél táblázatos formában
6. Összefoglalás
Mi a Stacking Gel?
A rakó gél egy alacsony koncentrációjú poliakrilamid gél, amelyet a koncentráltabb rezolváló gél (elválasztó gél) tetejére helyezünk SDS-PAGE technikával. A halmozó gélt az elektroforézis felbontásának javítására használják. A felbontás növekszik, mivel különbség van a halmozódó gél és a rezolváló gél koncentrációi között, amelyek hatással vannak a mintában lévő fehérjékre. Mivel a poliakrilamid koncentrációja a gélben alacsony, a pórusméret nagyobb. Ez szintén hozzájárul az elválasztás növeléséhez.
A rakó gél egy laza poliakrilamid gél, nagy pórusokkal, körülbelül 7% poliakrilamidból. Ezek a pórusok nem jelentenek jelentős akadályt a nagy fehérjemolekulák számára. Ezért ez a gél kissé befolyásolja a fehérjék mobilitását. Ez a fehérje mobilitása és nagysága szerint történő szétválasztást teszi lehetővé két gél közé koncentrálva.
01. ábra: SDS-PAGE akrilamid gél
A halmozó gél pH-ja 6,8. PH-ja savas, mint a gél 2 pH-egységgel történő felbontása. Ez a pH alacsonyabb ionerősséget, így nagyobb elektromos ellenállást jelent. Ez provokálja a fehérjék mobilitását, mint a gélben lévő más töltött részecskék.
Mi az elválasztó gél?
Az SDS-PAGEtechnika szétválasztó gélje vagy rezolváló gélje egy erősen koncentrált poliakrilamid gél, amelyet az alacsony koncentrációjú halmozó gél tetejére helyeznek. Az elválasztó gél nagy mennyiségű (10%) poliakrilamidot tartalmaz. Ennek a gélnek a pH-ját 8,8-ként tartják, ami magasabb pH-szint, mint a halmozó gél pH-jának.
02. ábra: Gélelektroforézis készülék
Amikor a fehérjemolekulák eljutnak a szétválasztó gélig, az említett molekulák migrációja lelassul, mert a szétválasztó gél nagy koncentrációjú, kis pórusméretű gél, amely jelentős gátaként szolgálhat a fehérjemolekulák mozgásában. Ez a lassulás lehetővé teszi, hogy a többi fehérje lassan vándoroljon, hogy felzárkózzon, ami keskeny, koncentrált sávot eredményez a két gél között.
Mi a kapcsolat a gél felrakása és a gél elválasztása között?
A Stacking Gel és az Separating Gel típusokat ugyanabban a készülékben használják
Mi a különbség a gél felrakása és az elválasztó gél között?
Különböző cikk a táblázat előtt
Halmozó gél vs elválasztó gél |
|
| A rakó gél egy alacsony koncentrációjú poliakrilamid gél, amelyet a koncentráltabb rezolváló gél (elválasztó gél) tetejére helyezünk SDS-PAGE technikával. | Az SDS-PAGE technikával elválasztó gél vagy rezolváló gél egy erősen koncentrált poliakrilamid gél, amelyet egy alacsony koncentrációjú halmozó gél tetejére helyezünk. |
| Elhelyezés | |
| Halmozó gélt helyezünk a felbontó (elválasztó) gélre. | A gélelektroforézishez használt edény aljára elválasztó gélt helyezünk. |
| Koncentráció | |
| A halmozódó gél koncentrációja magas. | Az elválasztó gél koncentrációja alacsony. |
| Poliakrilamid-tartalom | |
| A gél kb. 7% poliakrilamidot tartalmaz. | Az elválasztó gél körülbelül 10% poliakrilamidot tartalmaz. |
| pH | |
| A halmozó gél pH-ja 6,8. | Az elválasztó gél pH-ja 8,8. |
| Pórusméret | |
| Nagy pórusméretek vannak jelen a halmozó gélben. | Az elválasztó gélben kis pórusméretek vannak jelen. |
| Felbontás | |
| A halmozódó gél jobb felbontást biztosít. | A gél elválasztása gyenge felbontást eredményez. |
Összegzés - gél halmozása vs elválasztó gél
A rakó gél és a szétválasztó gél kétféle poliakrilamid gél, amelyet a fehérjemolekulák jobb elválasztására használnak egy adott mintában. A rakásgél és az elválasztó gél közötti különbség az, hogy a rakó gél pH-ja 6,8, míg az elválasztó gél pH-ja 8,8.
