Fő különbség - YAC vs M13 Phage Vector
A DNS-klónozás egy fontos folyamat, amely lehetővé teszi a lényeges DNS-fragmensek szaporítását. Szükség van egy specifikus DNS és vektor DNS összekapcsolására rekombináns DNS létrehozásához, amely átalakul a gazdaszervezetbe. A vektor olyan DNS-molekula, amely hordozóként viselkedik idegen genetikai anyag másik sejtbe vagy organizmusba történő hordozásáért. Képesnek kell lennie a gazdaszervezeten belüli replikációra és a rekombináns DNS többszörös kópiájának előállítására. Különböző típusú vektorokat használnak a DNS-klónozásban. Az élesztő mesterséges kromoszóma (YAC) és az M13 fágvektor kétféle. A legfontosabb különbség a YAC és az M13 fágvektor között az, hogy a YAC egy mesterséges kromoszóma, amely az élesztősejtekben replikálódik, míg az M13 fágvektor az M13 bakteriofág egyszálú körkörös DNS-je, amely az E Coli sejtekben replikálódik.
TARTALOM
1. Áttekintés és a legfontosabb különbség
2. Mi a YAC
3. Mi az M13 fágvektor
4. Egymás mellett történő összehasonlítás - YAC vs M13 fágvektor
5. Összefoglalás
Mi az a YAC Vector?
A YAC egy mesterségesen felépített kromoszóma, amely képes az idegen DNS nagy szegmensének hordozására és az élesztősejtekben történő replikációra. Centromer-, telomer- és autonóm replikációs szekvenciákkal rendelkezik, amelyek elengedhetetlenek a replikációhoz és a stabilitáshoz. A YAC-nak szelektív markert vagy markereket és restrikciós helyeket is tartalmaznia kell, hogy hatékony klónozó vektor legyen. Nagy, 1000 kb-tól 2000 kb-ig terjedő szekvenciák beilleszthetők a YAC-ba és átvihetők az élesztőbe.
01. ábra: YAC vektor
Mi az M13 Phage Vector?
Az M13 bakteriofág egy vírus, amely megfertőzi és szaporodik az E Coli-ban. Az M13 bakteriofág genomja kicsi, körülbelül 6,7 kb. Ez egyszálú, körkörös és pozitív érzékű DNS. Ez a vírus kifejezetten az E Coli baktériumokat fertőzi meg az F piluson keresztül. Miután bejut az ssDNS-be a baktériumba, szintetizálja komplementer szálát, és dsDNS-vé vagy az M13 replikatív formájává (RF) válik. Az RF plazmidként viselkedhet a gazdaszervezeten belül. A dsDNS replikálódik az E Coli-ban, és új fágokat tartalmazó ssDNS-t termel. Ezeket az új fágokat folyamatosan szabadítják fel az E Coli-ból anélkül, hogy megölik a gazdasejtet. A fertőzés azonban lelassítja az E Coli növekedését. A dsDNS baktériumsejtekből kivonható és vektorként használható a DNS klónozásában. M13 fágvektorokként ismertek. Könnyen kezelhetők és felhasználhatók, hasonlóan a plazmid vektorokhoz.
Ezen M13 fágok fertőzésének eredendő képessége jó minősítésként szolgál arra, hogy vektorként alkalmazzák a génklónozásban. Amikor az M13 vektorokká fejlődik, több elemet kell beépíteni genomjába. Ezek a gén a lac represszor (lac I) fehérjéhez, a lac Z gén kezelő-proximális régiója, lac promoter és többszörös klónozó hely (polylinker). Ha az M13 dsDNS-jét vektorként alkalmazzuk, akkor plazmid-vektorként kezelhető. Az ssDNS M13 alkalmazásának azonban előnyei vannak a DNS-szekvenálásban és a helyspecifikus mutagenezisben.
Mivel az M13 fágvektor több klónozási helyet hordoz a lacZ régióban, az újrakombinált vektorok könnyen azonosíthatók az IPTG-t és X-Gal-ot tartalmazó agarlemezeken végzett kék / fehér telepszűréssel. A lemezeken előállított kék plakkok nem tartalmazzák a rekombinált fágokat. Ezért klónozási célból kiválaszthatók a betétekkel ellátott fágok.
02. ábra: M13 bakteriofág
Mi a különbség a YAC és az M13 Phage Vector között?
Különböző cikk a táblázat előtt
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| A YAC egy géntechnológiával módosított kromoszóma, amely képes az idegen DNS nagy szegmensének hordozására és az élesztősejtekben történő replikációra. | Az M13 fágvektor az M13 bakteriofág által kifejlesztett vírusvektor, amelyet idegen DNS beiktatására használnak az E Coli-ba. |
| Célja | |
| A YAC-kat úgy tervezték, hogy a genomi DNS nagy fragmentumait élesztőbe klónozzák. | M13 fágvektort használnak idegen DNS beiktatására az E Coli-ba. |
| Beszúrás hossza | |
| A YAC-k megabázis méretű genomi betéteket (1000 kb - 2000 kb) tartalmazhatnak. | A betétek mérete körülbelül 1500 bps. |
| Építkezés | |
| A YAC DNS-t nehéz épen megtisztítani, és nagy koncentrációt igényel a YAC vektorrendszer előállításához. | Ciklikus fotoszintetikus elektronláncon keresztül történik. |
| Stabilitás | |
| A YAC instabil. | Az M13 fágok könnyen kivonhatók. |
| Méret | |
| Az enzimek nagyobb molekulák. | Az M13 fágok stabilak, mint a YAC. |
Összegzés - YAC vs M13 Phage Vector
A YAC egy mesterségesen felépített vektorrendszer, amely az élesztő kromoszóma egy meghatározott régióját használja, hogy genetikai anyag nagy szegmenseit helyezze az élesztősejtekbe. Az M13 fágvektor az M13 bakteriofágból származó vektorrendszer, amely gazdasejtként E colit használ. Ez a fő különbség a YAC és az M13 Phage Vector között. Mindkettő egyformán hasznos a rekombináns DNS-technológiában és a gének klónozásában.
