Fő különbség - Nick Translation vs Primer Extension
A Nick-transzláció és a primer-kiterjesztés a molekuláris biológia két fontos technikája. A legfontosabb különbség a nick transzláció és a láncindító kiterjesztése között az, hogy a nick transzlációs folyamat jelzett próbákat állít elő más hibridizációs technikákhoz, míg a primer kiterjesztési módszer egy adott RNS szekvenciát azonosít egy keverékből, és információt tár fel az mRNS expressziójáról. Mindkét technikának nagy jelentősége van, és rutinszerűen molekuláris kutató laboratóriumokban hajtják végre őket.
TARTALOM
1. Áttekintés és kulcsfontosságú különbségek
2. Mi a Nick Translation
3. Mi az Primer Extension
4. Egymás mellett történő összehasonlítás - Nick Translation vs Primer Extension
5. Összegzés
Mi a Nick Translation?
A Nick-transzláció egy fontos technika, amelyet különféle molekuláris biológiai technikákhoz, például blotoláshoz, in situ hibridizációhoz, fluoreszcens in situ hibridizációhoz stb. Készítettek. DNS-próbákat használnak specifikus DNS- vagy RNS-szekvenciák azonosítására. Jelölt próba segítségével specifikus fragmensek jelölhetők vagy vizualizálhatók a nukleinsav komplex keverékéből. Ezért a jelzett próbákat különféle technikák alkalmazásával állítják elő, amelyeket a különböző technikákhoz használnak. A Nick-transzláció egy olyan módszer, amely jelzett próbákat állít elő a DNáz 1 és a DNS polimeráz 1 enzimek segítségével.
A nick transzlációs folyamat a DNáz 1 enzim aktivitásával kezdődik. A DNáz 1 a nukleotidok közötti foszfodiészter kötések lehasításával rést mutat a kettős szálú DNS foszfát gerincében. Amint a nick létrejött, a nukleotid szabad 3'-OH csoportja keletkezik, és DNS-polimeráz 1 enzim hat rá. Az 1-es DNS-polimeráz 5'-3 'exonukleáz-aktivitása eltávolítja a nukleotidokat a nickből a DNS-szál 3'-iránya felé. Ezzel egyidejűleg a DNS-polimeráz 1 enzim polimeráz aktivitása működik, és nukleotidokat ad hozzá az eltávolított nukleotidok helyettesítésére. Ha a nukleotidokat jelöltük, akkor a helyettesítés a jelzett nukleotidokkal történik, és az azonosítás céljából megjelöli a DNS-t. Ez az újonnan szintetizált jelölt DNS használható próbaként a molekuláris biológia különböző hibridizációs reakcióiban.
01. ábra: Nick fordítási folyamat
Mi az a Primer Extension?
A primer kiterjesztés olyan technika, amelyet RNS-keverékből specifikus RNS-szekvencia keresésére és az mRNS-transzkriptum 5'-végének felkutatására használnak. Az RNS szerkezetének és expressziójának tanulmányozására is használják. Az alapozó kiterjesztési eljárást jelzett primerekkel vagy jelzett nukleotidokkal hajtjuk végre. Ha jelölt primereket használunk, akkor kizárjuk a cDNS szintéziséhez használt nukleotidok jelölésének szükségességét. Ennek a technikának több lépése van. Az RNS kivonásával kezdődik a mintából. Ezután egy jelzett oligonukleotid-primert adunk a keverékhez a szükséges alkotórészekkel együtt egy specifikus RNS-szekvencia cDNS-jének szintetizálásához. A primer a keverék komplementer szekvenciájával hegeszt. A primer lágyított szekvenciát templátként használva,az enzim reverz transzkriptáz szintetizálja az RNS-szekvencia komplementer DNS-ét (cDNS). A primer hőkezelés és a reverz transzkripció csak akkor fordul elő, ha a specifikus RNS szekvencia jelen van a mintában. Végül, amikor denaturáló gélelektroforézist hajtunk végre, meghatározható az RNS-szekvencia mérete. Könnyű megtalálni az mRNS (transzkripciós iniciációs hely) szekvencia +1 bázisát a láncindító kiterjesztési módszerrel is. A mintában jelenlévő mRNS mennyisége ezzel a módszerrel számszerűsíthető, ha felesleges primert használunk. Könnyű megtalálni az mRNS (transzkripciós iniciációs hely) szekvencia +1 bázisát a láncindító kiterjesztési módszerrel is. A mintában jelenlévő mRNS mennyisége ezzel a módszerrel számszerűsíthető, ha felesleges primert használunk. Könnyű megtalálni az mRNS (transzkripciós iniciációs hely) szekvencia +1 bázisát a láncindító kiterjesztési módszerrel is. A mintában jelenlévő mRNS mennyisége ezzel a módszerrel számszerűsíthető, ha felesleges primert használunk.
02. ábra: Alapozó meghosszabbítás
Mi a különbség a Nick Translation és a Primer Extension között?
Különböző cikk a táblázat előtt
Nick Translation vs Primer Extension |
|
| A Nick-transzláció olyan folyamat, amely jelölt DNS-próbákat hoz létre különböző hibridizációs reakciókhoz. | A primer kiterjesztés olyan technika, amelyet specifikus RNS keresésére vagy a génexpresszió tanulmányozására használnak. |
| Használt enzimek | |
| DNáz 1 és DNS polimeráz enzimeket használunk. | Fordított transzkriptáz enzimet alkalmazunk. |
| Fontosság | |
| A Nick-transzláció megkönnyíti a specifikus DNS-szekvencia jelölését. | Az alapozó kiterjesztése lehetővé teszi a specifikus mRNS szekvencia méret és a mintában jelenlévő mennyiség detektálását. |
Összegzés - Nick Translation vs Primer Extension
A Nick-fordítás a jelzett próbák szintézisére szolgáló módszer, amelyet a DNáz 1 és az E coli DNS polimeráz 1 enzimek aktivitásain alapulnak. Ez egy in vitro módszer, amelyet laboratóriumokban alkalmaznak különböző hibridizációs technikák előtt. A nick-transzláció során az 1-es DNS-polimeráz 5'-3 'exonukleáz-aktivitása eltávolítja a nukleotidokat a nick előtt, az 1-es DNS-polimeráz aktivitása pedig az eltávolított nukleotidokat a nick mögött lévő jelzett nukleotidokkal helyettesíti. A primer kiterjesztés egy olyan módszer, amelyet egy adott RNS transzkriptum kimutatására használnak egy keverékből, és az érdeklődő RNS méretének és mennyiségének számszerűsítésére. Ez a különbség a nick-fordítás és a primer kiterjesztése között.
