Különbség Az északi Déli és A Nyugati Blottolás Között

2024 Szerző: Mildred Bawerman | [email protected]. Utoljára módosítva: 2023-12-16 08:39

Fő különbség - északi vs déli vs nyugati blotting

A DNS, az RNS és a fehérjék specifikus szekvenciájának kimutatása elengedhetetlen a molekuláris biológia különféle típusú vizsgálataihoz. A gélelektroforézis olyan technika, amely a DNS-t, az RNS-t és a fehérjéket méretük szerint elválasztja. A gélprofilokból az adott DNS-szekvenciát, RNS-szekvenciát vagy fehérjét detektálják a speciális technikákkal, az úgynevezett blottolással és jelzett próbákkal történő hibridizációval. Három különböző blotolási módszer létezik, nevezetesen déli, északi és nyugati. Az északi déli és a nyugati blot között a legfontosabb különbség a molekula típusában rejlik, amelyet a mintából detektál. A Southern-blot egy olyan módszer, amely egy DNS-szekvenciát detektál egy DNS-mintából. Az Northern blotting olyan technika, amely egy RNS mintából egy specifikus RNS szekvenciát detektál. A Western blot egy olyan módszer, amely egy fehérjét egy fehérjéből detektál.

TARTALOM

1. Áttekintés és a legfontosabb különbség

2. Mi a Southern Blotting

3. Mi az Northern Blotting

4. Mi a Western Blotting

5. Egymás mellett történő összehasonlítás - Northern vs Southern vs Western Blotting

6. Összefoglalás

Mi a Southern Blotting?

A Southern blot technikát az EM Southern fejlesztette ki 1975-ben egy specifikus DNS szekvencia azonosítására egy DNS mintából. Ez az első blotolási technika, amelyet a molekuláris biológiában vezettek be. Lehetővé tette specifikus gének kimutatását a DNS-ből, specifikus fragmenseket a DNS-ből, stb. A Southern blot technikában több lépés is szerepel. Ezek a következők.

1. A mintából DNS-t izolálunk és restrikciós endonukleázokkal emésztünk.
2. Az emésztett mintát Agarose gélelektroforézissel választjuk el.
3. A gélben lévő DNS-fragmenseket lúgos oldat alkalmazásával egyetlen szálakká denaturáljuk.
4. Az egyszálú DNS-t kapilláris transzferrel egy nitrocellulóz szűrőmembránra viszik át.
5. Az átvitt DNS-t állandóan rögzítik a membránon.
6. A membránon rögzített DNS-t jelölt próbákkal hibridizáljuk.
7. A meg nem kötött DNS-t mosással mossuk le a membránról.
8. A röntgenfilmet a membránnak teszik ki, és autoradiográfiát készítenek.

A Southern-blot-ot a molekuláris biológia különböző aspektusaira alkalmazzák. Hasznos RFLP feltérképezésben, kriminalisztikai vizsgálatokban, DNS metilálásban a génexpresszióban, mutált gének kimutatásában genetikai rendellenességekben, DNS ujjlenyomat-vételben stb.

01. ábra: Southern Blotting technika

Mi az Northern Blotting?

A Northern blotting egy olyan módszer, amelyet egy adott RNS-szekvencia vagy mRNS-szekvencia kimutatására terveztek a génexpresszió tanulmányozása céljából. Ezt a technikát Alwine, Kemp és Stark fejlesztette ki 1979-ben. Több lépés miatt különbözik a keleti és a nyugati blot technikától. Ezt a technikát azonban gélelektroforézissel, blottolással és specifikus jelölt próbákkal végzett hibridizációval és detektálással is elvégzik. A Northern blot technikát a következőképpen hajtjuk végre.

1. Az RNS-t kivonjuk a mintából és gélelektroforézissel választjuk el.
2. Az RNS-t a gélről egy blottmembránra visszük és rögzítjük.
3. A membránt cDNS-ből vagy RNS-ből előállított jelölt próbával kezeljük (a próba komplementer a mintában lévő specifikus szekvenciával).
4. A próbát a membránnal inkubáljuk, hogy egy meghatározott szekvenciához kötődjön.
5. A nem kötött szondákat lemossák.
6. A hibridizált fragmenseket autoradiográf segítségével detektáljuk.

Az Northern blotting fontos eszköz a hibridizált mRNS kimutatásában és mennyiségi meghatározásában, az RNS lebomlásának tanulmányozásában, az RNS felezési idejének értékelésében, az RNS splicingjének detektálásában, a génexpresszió tanulmányozásában stb.

02. ábra: Northern Blotting

Mi a Western Blotting?

A Western-blotolás módszer egy specifikus fehérje kimutatására egy fehérje-keverékből jelölt antitest alkalmazásával. Ezért a Western blot immunblot néven is ismert. Ezt a technikát Towbin és munkatársai vezették be 1979-ben, és ma már a laboratóriumokban rutinszerűen elvégzik fehérjeelemzés céljából. A lépések a következők.

1. A mintából kivonják a fehérjéket
2. A fehérjéket méretük szerint elválasztjuk poliakrilamid gélelektroforézissel
3. Az elválasztott molekulákat elektroporációval PVDF membránba vagy nitrocellulóz membránba viszik át
4. A membránt blokkoljuk az antitestekkel való nem specifikus kötődés miatt
5. Az átvitt fehérjék primer antitesttel (enzimmel jelölt antitestek) kötődnek.
6. A membránt mossuk, hogy eltávolítsuk a nem specifikusan kötött primer antitesteket
7. A kötött antitesteket szubsztrát hozzáadásával és a képződött színes csapadék kimutatásával detektáljuk

A Western-blotolás hasznos az anti-HIV antitestek kimutatásában humán szérum mintában. A Western blot a hepatitis B fertőzés megerősítő tesztjeként és az őrült tehén betegség végleges tesztjeként is használható.

03. ábra: Western Blotting

Mi a különbség az északi déli és a nyugati blottolás között?

Különböző cikk a táblázat előtt

Északi vs déli vs nyugati blotting
Kimutatott molekula típusa
Northern Blotting	Az Northern blotting egy specifikus RNS szekvenciát detektál egy RNS mintából.
Southern Blotting	A Southern-blot egy specifikus DNS-szekvenciát detektál egy DNS-mintából.
Western Blotting	A Western blot egy specifikus fehérjét detektál egy fehérjemintából.
A gél típusa
Northern Blotting	Ehhez Agarose / formaldehid gélt használunk.
Southern Blotting	Ez egy Agarose gélt használ.
Western Blotting	Ennek során poliakrilamid gélt használunk.
Blot módszer
Northern Blotting	Ez egy kapilláris transzfer.
Southern Blotting	Ez egy kapilláris transzfer.
Western Blotting	Ez egy elektromos transzfer.
Használt szondák
Northern Blotting	radioaktívan vagy nem radioaktívan jelölt cDNS vagy RNS próbák.
Southern Blotting	A DNS-próbákat radioaktívan vagy nem radioaktívan jelölik.
Western Blotting	Próbaként primer antitesteket használnak.
Detection System
Northern Blotting	Ez autoradiográf, vagy fény- vagy színváltozás észlelésével történik.
Southern Blotting	Ez autoradiográf segítségével történik, a fény vagy a színváltozás észlelésével.
Western Blotting	Ez a fény vagy színváltozás érzékelésével történik.

Összegzés - északi vs déli vs nyugati blotting

A blotolás egy speciális technika, amelyet a mintákból származó specifikus DNS, RNS vagy fehérje azonosítására fejlesztettek ki. Három különálló blotolási eljárás létezik, nevezetesen északi, déli és nyugati, egy adott típusú molekula kimutatására. A Northern blotting technikát egy specifikus RNS szekvencia kimutatására tervezték RNS keverékéből. A Southern-blot technika lehetővé teszi egy specifikus DNS-szekvencia kimutatását egy DNS-mintából, és Western-blot-technikát dolgoznak ki egy adott fehérje fehérje-keverékből történő azonosítására.