Kulcskülönbség - cDNS vs Genomic Library
A DNS-könyvtáraknak két fő típusa van, amelyeket a tudósok géntechnológiai technikák segítségével állítottak össze. Ezek a cDNS könyvtár és a genomi könyvtár. A legfontosabb különbség a cDNS és a genomi könyvtár között az, hogy a cDNS könyvtár egy szervezet teljes mRNS-jének klónozott komplementer DNS-ét tartalmazza, míg a genomi DNS-könyvtár egy szervezet teljes genomjának klónozott fragmenseit tartalmazza. A genomi DNS könyvtár nagyobb, mint a cDNS könyvtár.
TARTALOM
1. Áttekintés és kulcsfontosságú különbségek
2. Mi a cDNS könyvtár
3. Mi az a genomi könyvtár
4. Egymás melletti összehasonlítás - cDNS vs genomi könyvtár
5. Összegzés
Mi az a genomi könyvtár?
A genomi DNS könyvtár klónok gyűjteménye, amelyek egy szervezet teljes genomi DNS fragmenseit hordozzák. Ez tartalmazza a szervezet teljes genomi DNS-ét, beleértve a kódoló és a nem kódoló szekvenciákat. A genomi könyvtár felépítését a rekombináns DNS-technológia követi, amelyet klónozás követ (géntechnológia). A felépítésnek különböző lépései vannak, amint az a 01. ábrán látható. A folyamat a genomiális DNS-izolációval kezdődik. Megfelelő DNS-kivonási protokoll alkalmazásával el kell különíteni egy szervezet teljes genomiális DNS-ét. Ezután a DNS-t restrikciós endonukleázokkal (DNS-vágó enzimek) kell kezelhető méretűvé vagy specifikus fragmensekké alakítani. A töredezett DNS-t vektorokba kell beilleszteni DNS-ligázok (DNS-csatlakozó enzimek) felhasználásával. A vektor önreplikáló organizmus. A rekombináns DNS-technológiában plazmidokat és bakteriofágokat használnak. Ezeket a ligált vektorokat rekombináns DNS-molekulákként ismerjük, mivel saját és inszertált DNS-szekvenciákat egyaránt hordoznak. Rekombináns vektorokat adunk egy gazdabaktériumhoz, és a baktériumsejtben lévő rekombináns vektorok felvételére készítjük őket. Rekombináns vektorokat (plazmidokat) tartalmazó baktériumokat tenyésztő táptalajban kell tenyészteni. A baktériumok szaporodása során a baktériumok DNS-je rekombináns plazmidokkal együtt reprodukálja genomjaikat és klónokat termel. Ezek a klónok a forrásszervezet teljes genomját tartalmazzák. Ennélfogva genomi könyvtárnak hívják. A plazmidok könnyen elválaszthatók a bakteriális kromoszóma DNS-től, hogy létrehozzák az adott szervezet genomi könyvtárát. Ha egy adott szervezet tartalmaz érdeklődő géneket,molekuláris próbák (markerek) segítségével hibridizációval könnyen kimutatható a genomi könyvtárban.
A genomi könyvtárak fontosak a genomi szerkezet és funkció, a specifikus gének, a gének elhelyezkedése, a gének feltérképezése, a mutációk, a génszekvenálás, az új terápiás gének azonosítása stb.
_1 ábra: Genomikus könyvtár felépítése
Mi az a cDNS könyvtár?
A cDNS-könyvtár egy komplementer DNS (cDNS) klón gyűjteménye, amely egy szervezet teljes mRNS-jéből szintetizált. Az építési eljárás különböző lépéseket tartalmaz. Az első lépés a teljes mRNS tisztítása egy szervezetből. Az izolált mRNS-t reverz transzkripciónak nevezett eljárással alakítják át cDNS-szálakká. A reverz transzkripciót egy reverz transzkriptáz nevű enzim segíti. Kis 3 'primert használ, és elindítja az első cDNS-szál szintézisét, amely komplementer a templát mRNS-szálhoz. Az így kapott kettős szálú cDNS-t restrikciós endonukleázok alkalmazásával kisebb fragmensekké alakítják, és megfelelő vektorokba inszertálják. Ezeket a felépített rekombináns molekulákat ezután egy gazdaszervezetbe adjuk és tenyésztő táptalajban tenyésztjük klónok előállítása céljából. Egy szervezet cDNS-fragmenseit tartalmazó klónok gyűjteménye cDNS-könyvtárként ismert. A teljesen szeletelt érett mRNS nem tartalmaz intronokat és szabályozó régiókat. Ezért a nem kódoló fragmensek nincsenek jelen a cDNS könyvtárakban, ellentétben a genomi könyvtárakkal.
A cDNS könyvtárak fontosak a kódoló régiók, a génfunkciók, a gének expressziójának stb. elemzésében.
_2 ábra: cDNS könyvtár felépítése
Mi a különbség a cDNS és a Genomic Library között?
Különböző cikk a táblázat előtt
cDNS vs Genomic Library |
|
| A cDNS könyvtár a klónok gyűjteménye, amelyek egy organizmus mRNS-jéhez komplementer DNS-t hordoznak | A genomi könyvtár egy klón gyűjteménye, amely egy szervezet teljes genomiális DNS-ét hordozza. |
| Kódolás vs nem kódolási szekvenciák | |
| a cDNS könyvtár csak a kódoló szekvenciákat tartalmazza; nem tartalmaz intronokat. | A genomi könyvtár a teljes genomi DNS-ből áll, beleértve a nem kódoló (intron és szabályozó) DNS-t is. |
| Méret | |
| A cDNS könyvtár kicsi. | A genomi könyvtár nagy. |
| Kiindulási anyag | |
| Kiindulási anyag az mRNS | A kiindulási anyag a DNS. |
| A fordított átírás bevonása. | |
| A fordított transzkripció az első cDNS-szál szintézisében történik. | A fordított átírás nem történik meg. |
Összegzés - cDNS és Genomic Library
A genomi könyvtár egy organizmus fragmentált teljes genomi DNS-ét hordozó klónok populációját képviseli. A cDNS könyvtár a szervezet teljes mRNS-jének komplementer DNS-ét hordozó klónok populációját reprezentálja. A cDNS-klón csak az mRNS-ben található szekvenciákat tartalmazza, míg a genomi klón a teljes genom szekvenciáit tartalmazza. Ez a különbség a cDNS és a genomi könyvtár között.
