Fő különbség - SDS-oldal vs Western Blot
A Western-blotolás olyan technika, amely egy fehérjét egy fehérjemintából detektál. Ezt a technikát több kulcsfontosságú lépésben hajtják végre: gélelektroforézissel, blottolással és hibridizációval. A nátrium-dodecil-szulfát poliakrilamid gélelektroforézis (SDS Page) egyfajta gélelektroforézis technika, amelyet a fehérjék méretük (molekulatömegük) szerinti szétválasztására használnak. A Western blot egy blotmembrán speciális lapja, amelyet az SDS Page fehérjék azonos mintázatának átvitelére használnak. A legfontosabb különbség az SDS Page és a Western blot között az, hogy az SDS Page lehetővé teszi a fehérjék elválasztását egy keverékben, míg a Western blot lehetővé teszi egy adott fehérje detektálását és mennyiségi meghatározását egy keverékből. Mindkettő hasznos a fehérje-analízis vizsgálatokban.
TARTALOM
1. Áttekintés és a legfontosabb különbség
2. Mi az SDS
3. oldal? Mi a Western Blot
4. Egymás melletti összehasonlítás - SDS oldal vs Western Blot
5. Összegzés
Mi az SDS oldal?
Az SDS Page egy gélelektroforézis technika, amelyet fehérje szétválasztására használnak. Általában biokémiában, genetikában, kriminalisztikában és molekuláris biológiában használják. Miután a fehérjéket kivontuk a mintából, SDS-ből és poliakrilamidból álló gélen futtattuk őket. Az SDS egy anionos detergens, amelyet a fehérjék (denaturált fehérjék) linearizálására és a linearizált fehérjék molekulatömegével arányos negatív töltésre adnak. A poliakrilamid válik a gél szilárd hordozójává. A negatív töltésű denaturált fehérjék a készülék pozitív vége felé vándorolnak a gélen keresztül. A fehérjék nagysága szerint a vándorlási sebesség a fehérjék között eltér, és szétválás következik be. Ezért az SDS oldal hasznos az egyes fehérjék méretük szerinti szétválasztásában.
A poliakrilamid gél előállítása a fehérjék frakcionálására az SDS döntő lépése. A poliakrilamid megfelelő koncentrációja és az alkalmazott térhálósító szer típusa erősen befolyásolja a gél fizikai tulajdonságait, ami a különböző fehérjék tényleges elválasztását teszi lehetővé. A hatékony elválasztás érdekében a gél pórusméretét megfelelően kell kezelni. Az SDS Page azonban nagy felbontású fehérjeválasztási technikának számít.
Az SDS Page technikának nagy korlátja van a fehérjeelemzésben. Mivel az SDS denaturálja a fehérjéket a szétválasztás előtt, nem teszi lehetővé az enzimatikus aktivitás, a fehérjéhez kötődő kölcsönhatások, a fehérje kofaktorok stb. Kimutatását.
01. ábra: SDS oldal
Mi a Western Blot?
A Western blot technika lehetővé teszi egy specifikus fehérje kimutatását egy fehérje keverékből, és a fehérje mennyiségének és molekulatömegének mérését. A Western blot az a membrán, amelyet a blotolási eljárás során használnak az SDS-poliakrilamid gélben lévő fehérjeminták tükörképének megszerzéséhez. A Western-blotoláshoz használt membránt többnyire nitrocellulóz vagy polivinilidén-difluorid (PVDF) alkotja. Az átvitt fehérjével rendelkező membrán felhasználható a kívánt fehérje azonosítására. Kiváló minőségű antitestre van szükség a kívánt fehérje hibridizációval történő kimutatásához. Az antitest kötődik specifikus antigénjéhez, és feltárja a kívánt antigén jelenlétét, amely egy fehérje.
A fehérjék átvitelét az SDS poliakrilamid gélből a Western blotba elektroblotolással végezzük. Hatékony és gyors módszer, amely a fehérjék elektroforézisét okozza a gélből, és átjut a nitrocellulóz membránra (western blot).
02. ábra: Western Blot
Mi a különbség az SDS Page és a Western Blot között?
Különböző cikk a táblázat előtt
SDS oldal vs Western Blot |
|
| Az SDS Page egy gélelektroforézis technika. | A Western blot olyan technika, amelyet egy membránon végeznek egy adott fehérje kimutatására egy keverékből. |
| Használat | |
| Az SDS oldal lehetővé teszi a fehérjék méretük szerinti elválasztását. | A Western blot lehetővé teszi a fehérjék átvitelét az SDS oldalgélre anélkül, hogy megváltoztatná annak mintázatát, és lehetővé teszi a specifikus antitestekkel történő hibridizációt. |
| Hátrányok | |
| A fehérje denaturálása, a magas költség és a neurotoxin vegyszerek jelenléte hátrányos e technikában. | Ez a technika időigényes és jól tapasztalt személyes és speciális ellenőrzött körülményeket igényel. |
Összegzés - SDS oldal vs Western Blot
Az SDS-oldal és a Western blot két módszer vesz részt a fehérjeelemzésben. Az SDS Page lehetővé teszi a fehérjék könnyű szétválasztását gélen, molekulatömegük szerint. A Western blot segít egy specifikus fehérje jelenlétének és mennyiségének megerősítésében specifikus antitestekkel történő hibridizáció révén. Ez a különbség az SDS Page és a Western blot között.
