Fő különbség - Gélelektroforézis és SDS oldal
A gélelektroforézis olyan technika, amely elválasztja a makromolekulákat egy elektromos mezőben. A molekuláris biológiában elterjedt módszer a DNS-ek, az RNS-ek és a fehérjék elkülönítése a keverékektől azok molekulamérete szerint. Az SDS Page egyfajta gélelektroforézis, amelyet arra használnak, hogy méretük alapján elválassza a fehérjéket a fehérje-keveréktől. A gélelektroforézis a DNS, az RNS és a fehérje szétválasztására alkalmazott normál technika kifejezésére utal, míg az SDS Page egyfajta gélelektroforézis. Ez a legfontosabb különbség a gélelektroforézis és az SDS között.
TARTALOM
1. Áttekintés és legfontosabb különbségek
2. Mi a gélelektroforézis
3. Mi az SDS
4. oldal egymás mellett összehasonlítás - gélelektroforézis vs SDS
5. oldal
Mi a gélelektroforézis?
A gélelektroforézis a laboratóriumokban általánosan alkalmazott módszer a töltött molekulák, például DNS, RNS, fehérjék stb. Elkülönítésére keverékeiktől. A gélelektroforézis során gélt használunk. Molekulaszitaként működik. A gélelektroforézis során kétféle gélt használnak, nevezetesen az agarózt és a poliakrilamidot. A gél kiválasztása és a gélkészítmény fontos tényezők, amelyeket figyelembe kell venni a gélelektroforézis során, mivel a gél pórusméretét gondosan kell kezelni, hogy a gélelektroforézis révén a molekulák jól elkülönüljenek. A gélelektroforézis elektromos mezője a gél két végéhez kapcsolódik. A gél egyik vége pozitív töltést mutat, míg a másik vége negatív töltésű.
A DNS és az RNS negatív töltésű molekula. Miután betöltöttük őket a gélbe a gél negatív végéből és felvittük az elektromos mezőre, a gél pórusain át a gél pozitív töltésű vége felé vándorolnak. A migráció sebessége a töltéstől és a molekula méretétől függ. A kisebb molekulák könnyen elvándorolnak a gél pórusain, mint a nagyobb molekulák. Ezért a kisebb molekulák nagy távolságot tesznek meg a gélen, a nagyobbak pedig rövid távolságot. A molekulák gélen történő mozgásának megfigyeléséhez speciális típusú festékeket használnak. Az elektromos mezőt egy bizonyos ideig alkalmazzák és leállítják, hogy megakadályozzák a molekulák elvesztését és a molekulákat az utazott helyzetükben tartsák. Különböző sávok figyelhetők meg a gélben. Ezek a sávok különböző méretű molekulákat képviselnek. Ennélfogva,a gélelektroforézis hasznos a molekulák méretük szerinti megkülönböztetésére.
A gélelektroforézist a molekuláris biológia preparatív technikájaként beépítik a különféle technikákba, mint például a PCR, az RFLP, a klónozás, a DNS-szekvenálás, a Southern-blottolás, a genom-feltérképezés stb.
01. ábra: Agaróz gél elektroforézis
Mi az SDS oldal?
A nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézis (SDS Page) a gélelektroforézis egy típusa, amelyet a fehérjék szétválasztására használnak. Ha a fehérjék szétválasztására gélelektroforézist alkalmaznak, speciális kezelésekre van szükség, mivel a fehérjék nem töltődnek negatívan, mint a DNS és az RNS, és nem vándorolnak a pozitív vagy a negatív vég felé. Ezért a fehérjéket denaturálják és negatív töltéssel vonják be a gélelektroforézis előtt. Ez nátrium-dodecil-szulfát (SDS) nevű mosószerrel történik. A gélelektroforézis, amely SDS-t és egy poliakrilamid-gélt használ a hordozó közegként, SDS Page 1 néven ismert. Ezt a technikát általában használják a biokémiában, a genetikában, a kriminalisztikában és a molekuláris biológiában.
Az SDS Page során a fehérjéket összekeverjük az SDS-sel. Az SDS lineáris formába bontja a fehérjéket, és negatív töltéssel vonja be őket molekuláris tömegükkel arányosan. A negatív töltés miatt a fehérjemolekulák a gél pozitív töltési vége felé vándorolnak, és molekuláris tömegük szerint elválnak. Az SDS Page-ben a gél szilárd hordozójaként poliakrilamidot használnak. A fehérjék tényleges szétválasztása elsősorban a gél tulajdonságaitól függ. Ezért a poliakrilamid gél előkészítését gondosan kell elvégezni, és a megfelelő poliakrilamid koncentrációkat kell alkalmazni. A poliakrilamid gélek nagy felbontásúak, mint az agaróz gélek. Ezért az SDS Page-t nagy felbontású technikának tekintik a fehérje szétválasztására.
Az SDS Page egyfajta denaturáló gélelektroforézis. A fehérje-elemzésben jelentős korlátai vannak. Mivel az SDS denaturálja a fehérjéket a szétválasztás előtt, nem teszi lehetővé az enzimatikus aktivitás, a fehérjéhez kötődő kölcsönhatások, a fehérje kofaktorok stb. Kimutatását.
02. ábra: SDS oldal
Mi a különbség a gélelektroforézis és az SDS Page között?
Gélelektroforézis vs SDS |
|
| A gélelektroforézis olyan módszer, amelyet a makromolekulák szétválasztására használnak elektromos mező felhasználásával. | Az SDS Page egy nagy felbontású gélelektroforézis technika, amelyet a fehérjék tömegük alapján történő szétválasztására használnak. |
| Gel Run | |
| Vízszintesen vagy függőlegesen végezhető. | Az SDS oldal mindig függőlegesen fut. |
| Az elválasztás alapja | |
| Az elválasztás a töltés és a méret szerint történik. | A fehérje elválasztása a tömeg és a töltés szerint történik. |
| Felbontás | |
| Az agaróz gélelektroforézisnek alacsony, a poliakrilamid gélelektroforézisnek nagyobb a felbontása | Az SDS Page felbontása jobb. |
| Denaturáció | |
| A gélelektroforézis egyaránt tartalmaz denaturáló és nem denaturáló technikákat. | Az SDS Page denaturálja a fehérjéket a szétválasztás előtt. |
Összegzés - Gélelektroforézis vs SDS
A gélelektroforézis a DNS, az RNS és a fehérjék elválasztására és elemzésére általánosan alkalmazott technika méretük és töltésük alapján. A gélelektroforézisnek két fő típusa van, nevezetesen az agaróz gélelektroforézis és a poliakrilamid gélelektroforézis. Az agaróz géleket főleg nukleinsav-elválasztásra használják; ha nagyobb felbontásra van szükség, poliakrilamid géleket használunk. Az SDS Page egyfajta gélelektroforézis, amelyet általában a fehérjék komplex keverékeinek elválasztására használnak. Nagy felbontású fehérjeválasztási technikának tekintik. Ez a különbség a gélelektroforézis és az SDS között.
