Fő különbség - T4 vs T7 DNS-ligáz
A DNS-ligáz a molekuláris biológiai technikákban alkalmazott fontos enzim. Molekularagasztóként működik, hogy összekapcsolja a nukleotidokat úgy, hogy foszfodiészter kötéseket képez a nukleotidok között. A foszfodiészter kötések a cukorrész 3 'hidroxil vége és az 5' vég foszfát csoport között jönnek létre. A DNS-ligáz létfontosságú a replikációs folyamatban a lemaradt szál Okazaki-fragmenseinek összekapcsolásához, valamint a DNS-helyreállítási mechanizmusok és az in vitro klónozási kísérletek során, hogy a kívánt gént összekapcsolják a vektorgenommal. Két fő DNS-ligázt használnak jelenleg a molekuláris biológusok: a T4 és a T7 DNS-ligázokat. A T4 DNS-ligáz az egyik első enzim, amelyet a T4 bakteriofágból izoláltak. A T7 DNS-ligáz, amely egy kisebb fehérje, a T7 bakteriofágból izolált enzim. Ez a legfontosabb különbség a T4 és T7 DNS ligázok között.
TARTALOM
1. Áttekintés és kulcsfontosságú különbség
2. Mi a DNS-ligáz
hatása 3. Mi a T4 DNS-ligáz
4. Mi a T7 DNS-ligáz
4. A T4 és a T7 DNS-ligáz hasonlóságai
5. Egymás melletti összehasonlítás - T4 vs T7 DNS-ligáz táblázatos formában
6. Összegzés
Mi a DNS-ligáz hatása?
A DNS-ligálás három lépésben történik. Az első lépés egy nukleofil támadás az ATP alfa-foszforja ellen, kovalens enzim-adenilát köztiterméket generálva, amelyben az AMP a lizin terminális oldallánc-nitrogénjéhez kapcsolódik. A második lépésben az 5'-foszfát-végű DNS-szubsztrát révén nukleofil támadás következik be az enzim-adenilát foszforán, lizin felszabadulása és DNS-adenilát képzése. Az utolsó lépésben a DNS-adenilátot egy másik DNS-szál 3'-OH-ja támadja meg, felszabadítva az AMP-t és csatlakozva a polinukleotidokhoz.
Mi a T4 DNS-ligáz?
A T4 ligáz volt az első ligáz, amelyet Meselson, Weigle és Kellenberger azonosított és azonosított, és ez volt az első kereskedelmi ligáz. A T4 DNS-ligáz egy ATP-függő enzim, amely katalizálja a foszfodiészter kötés képződését. Ez egyetlen polipeptidlánc 487 aminosavmaradékkal és molekulatömege körülbelül 77 kDa. Aktivitásának optimális pH-ja a 7,5 és 8 között van.
01. ábra: T4 DNS-ligáz
A T4 DNS-ligáz, amint a neve is mutatja, jelen van a T4 bakteriofágban, és akkor izolálták, amikor a fág E. coli fertőzéssel előállította az enzimet. Az enzim tompa végű kettős szálú DNS duplexeket ligál, és a kötendő fragmenseknek egymás közvetlen közelében kell lenniük.
Mi a T7 DNS-ligáz?
A T7 ligáz 41 kDa fehérje, amelyet a T7 Bacteriophage termel, és E. coli sejtek fertőzésével izolálják. A T7 ligáz fő feladata a DNS duplexek foszfodiészter kötéseken keresztül történő ligálása és a klónozási kísérletek során a DNS közeli fragmenseinek összekapcsolása. A T7 DNS-ligáz optimális pH-ja 7,0-7,2 között van. A T7 ligáz ATP-függő. A T7 DNS-ligázok képesek a DNS- és RNS-hibridek lágyítására is, kóros konformációkhoz vezetve a transzkripció során; ezt a jelenséget azonban még in vitro vizsgálatok folytatják.
Milyen hasonlóságok vannak a T4 és a T7 DNS-ligáz között?
- A T4 és T7 DNS-ligáz részt vesz egy ligációs reakcióban azáltal, hogy a DNS-duplexeket meggyengíti a DNS-fragmens 3'-OH és 5'-foszfát-vége közötti foszfodiészter kötés kialakításán keresztül.
- Mindkét enzim tompa végű DNS duplexeket ligál, amelyek egymás közelében vannak.
- Mindkét enzim ATP-függő.
- Ezeket az enzimeket úgy izolálják, hogy E. coli sejteket fertőznek az adott bakteriofággal.
-
Mindkét enzim alkalmazása:
- Molekuláris klónozás - az érdekes gén ligálása a vektorhoz
- DNS-javítás - a kettős szálú fülkék javításához
- In vitro DNS-replikáció
- Ligázláncreakció
Mi a különbség a T4 és a T7 DNS-ligáz között?
Különböző cikk a táblázat előtt
T4 vs T7 DNS-ligáz |
|
| T4 DNS Ligáz típusú, a T4 bakteriofágból izolált DNS-ligáz, amely foszfodiészter kötés kialakításán keresztül részt vesz a szomszédos DNS-fragmensek ligálásában. | T7 DNS Ligáz típusú, a T7 bakteriofágból izolált DNS-ligáz, amely foszfodiészter kötés kialakításán keresztül részt vesz a szomszédos DNS-fragmensek ligálásában. |
| A fehérje mérete | |
| A T4 DNS-ligáz mérete 77 kDa - nagyobb, mint a T7 DNS-ligázé. | A T7 DNS-ligáz mérete 41 kDa. |
| Optimális pH | |
| A T4 DNS-ligázt működtető pH-tartomány 7,5-8,0. | A T7 DNS-ligázt működtető pH-tartomány 7,0 - 7,2. |
Összegzés - T4 vs T7 DNS-ligáz
A DNS-ligázok a molekuláris klónozásban részt vevő enzimek fontos osztálya a kívánt gént tartalmazó rekombináns DNS-molekulák előállításához. A ligációs reakció energiát hasznosító reakció, és új kutatási tanulmányok folynak a pontosság javítására a rendelkezésre álló ligázok modulálásával. A T4 és T7 DNS-ligázok a molekuláris biológiai technikákban alkalmazott két fontos DNS-ligáz enzim típusa. A T7 DNS-ligáz szintén olyan eredmények eredménye, amelyek a T4-fertőzött E. coli-ból izolált primer ligázon alapultak. A T7-et kisebb hatékonysága és pontossága mutatja be funkciójának végrehajtásában. Ez a különbség a T4 és a T7 ligáz között.
T4 vs T7 DNS Ligase PDF verziójának letöltése
A cikk PDF-verzióját letöltheti, és offline célokra is használhatja, az idézési megjegyzések szerint. Kérjük, töltse le itt a PDF verziót. Különbség a T4 és a T7 Ligase között.
