PCR vs valós idejű PCR
A PCR vagy a polimeráz láncreakció egy forradalmasított felfedezés a modern molekuláris biológiában, amelyet először Kary Mullis vegyész fejlesztett ki 1983-ban. Ez lehetővé teszi egy komplex DNS egyetlen szekvenciájának amplifikálását elemzés céljából. A PCR alapgondolata az, hogy két primer, amely komplementer a DNS-szekvencia ellentétes szálaival, egymás felé orientálódik; a primerek komplementer szálakat hoznak létre, amelyek mindegyike tartalmazza a másik primert. Ezért az eredmény egy nagy mennyiségű szekvencia, amely megfelel a két primer között elhelyezkedő DNS-nek. DNS-polimeráz enzimet használnak a primerek kiterjesztésére a PCR-ben. A DNS-polimeráz egy hőstabil enzim, amely képes túlélni magas hőmérsékleten (94–95 ° C), amelyet a templát DNS denaturálásához használnak.
A PCR három lépést tartalmaz, nevezetesen ismételt denaturálási köröket, a primerek lágyítását és a DNS szintézisét. A reakció végrehajtására termociklusos gépet használnak, hogy be lehessen programozni a hőmérséklet gyors és pontos megváltoztatására. A PCR alkalmazása bűnügyi nyomozás, DNS-ujjlenyomat, kórokozók kimutatása és korai emberi fajok DNS-elemzése.
Mi a hagyományos PCR?
A hagyományos PCR-nek három fő szakasza van, nevezetesen; DNS-amplifikációs szakasz, a PCR elválasztása és a termékek kimutatása. A DNS-szegmensek elválasztását tipikusan agarózgél-elektroforézissel végezzük. A termékeket ezután etheiduim-bromiddal festjük. Végül a detektálást a gélek UV-fény alatt történő megjelenítésével érjük el. Ezért a hagyományos PCR végeredményeit nem fejezzük ki számokban. Normál esetben a hagyományos PCR csak egyetlen paraméter detektálására képes.
Mi a valós idejű PCR?
A valós idejű PCR detektálja a termékek amplifikációját, mivel a termékek szintetizálódnak. A technológia fejlődésével a PCR nagyon népszerű technika lett, különösen az élelmiszerekben található baktériumok kimutatására és azonosítására. A valós idejű PCR fluoreszcens festékrendszert és fluoreszcens detektálási képességgel ellátott termociklist használ.
Mi a különbség a hagyományos PCR és a valós idejű PCR között?
• A hagyományos PCR időigényesebb, mivel gélelektroforézist használ az amplifikált PCR-termékek elemzéséhez. Ezzel szemben a valós idejű PCR kevésbé időigényes, mivel képes észlelni az amplifikációkat a reakció korai fázisaiban.
• A valós idejű PCR a PCR exponenciális növekedési szakaszában gyűjt adatokat, míg a hagyományos PCR a reakció végpontjában.
• Lehet, hogy a hagyományos PCR végpont eredményei nem túl pontosak, de a valós idejű PCR eredményei nagyon pontosak.
• A valós idejű PCR érzékenyebb, mint a hagyományos PCR.
• A hagyományos PCR nagyon gyenge felbontású, míg a valós idejű PCR nagyon kis változásokat képes észlelni a nagy felbontás miatt.
• A hagyományos PCR végpont-detektálásának rövid dinamikus tartománya van, míg a valós idejű PCR-detektálásnak széles dinamikus tartománya van.
• A hagyományos PCR-től eltérően az automatikus detektálási technikák megtalálhatók a valós idejű PCR-ben.
• A hagyományos PCR rendkívül kifinomult és munkaigényes, mint a valós idejű PCR.
• A valós idejű PCR-től eltérően a hagyományos PCR nem tehet különbséget az elhalt és az élő baktériumok között.
• A valós idejű PCR fluoreszcens festékrendszert alkalmaz a termékek kimutatására, míg a hagyományos PCR etídium-bromidot és UV-fényt használ az agaróz gélközeg sávjainak megjelenítésére.
