Fő különbség - Phusion vs Taq Polymerase
A DNS-polimerázok széles körben alkalmazott enzimek a molekuláris biológiai technikákban, és természetesen jelen vannak minden organizmusban, amely DNS-replikáción megy keresztül. Ezek a legfontosabb polimerizáló enzimek, amelyek részt vesznek a replikáció során. A DNS-polimeráz képes nukleotidokat hozzáadni a DNS-szál szabad 3'-végéhez, ezáltal egy új szál meghosszabbodását okozza. Jelenleg a betegségdiagnosztika és az ipari alkalmazások molekuláris biológiai fejleményei miatt fontos a különböző előnyös tulajdonságokkal rendelkező polimerázok gyártása. Ez növeli a módszer pontosságát és gyorsabbá teszi a technikát. A fúziós és a Taq-polimeráz két, kereskedelemben előállított, hőstabil polimeráz enzim, amelyeket speciális molekuláris alkalmazásokban használnak. A Phusion egy Pyrococcus furiosusból izolált DNS-polimeráz, amelyet főleg klónozási kísérletek során alkalmaznak a hűség növelése érdekében. A Taq DNS polimeráz a polimeráz láncreakcióban (PCR) használt standard DNS polimeráz, amelyet a hőstabil baktériumtól izolálnak; Thermus aquaticus. A két enzim közötti legfontosabb különbség a forrás mikroorganizmus. A fúziót a Pyrococcus furiosus-ból, míg a Taq-polimerázt a termofilből, a Thermus aquaticus-ból izolálják. A Taq-polimerázt a termofilből, a Thermus aquaticus-ból izolálják. A Taq-polimerázt a termofilből, a Thermus aquaticus-ból izolálják.
TARTALOM
1. Áttekintés és fő különbség
2. Mi a fúzió
3. Mi a Taq-polimeráz
4. A fúzió és a Taq-polimeráz közötti hasonlóság
5. Egymás melletti összehasonlítás - Phusion vs Taq-polimeráz táblázatos formában
6. Összefoglalás
Mi a Phusion?
A fúziós DNS-polimeráz egy új polimeráz, amelyet úgy állítanak elő, hogy az enzimet izolálják a Pyrococcus furiosus-tól, amely egy extrémophil Archaea. Ezek a mikrobák rendkívül magas hőmérsékletű körülmények között tartózkodnak, ezáltal a polimeráz hőállóságú polimerázzá válik. A fúziós polimerázt rendkívüli hűség elérésére használják a hagyományos hőstabil polimerázzal szemben; Taq-polimeráz. A fúziós polimeráz képes hosszú templátok amplifikálására, 7,5 kb genom DNS-ig. Az optimális polimerizációs kapacitása Phusion polimeráz 72 0 C-on Phusion is használják klónozási termékek szekvenálás, expresszió elemzése és a mutáció elemzését.
A fúziós DNS-polimeráz 3 '- 5' exonukleáz aktivitással rendelkezik. Ez lehetővé teszi az újonnan szintetizált szál korrektúráját a szintézis után. Ezért a nukleotidok eltérése könnyen kijavítható. Így kisebb a hibaaránya. A fúziós polimeráz általános előnyei;
- Extrém hűség
- Nagy sebesség és csökkentett hosszabbítási idő
- Robusztus reakciók és minimális optimalizálást igényel
- Magas hozam
01. ábra: Fúzió
A fúziós polimeráz fő hátránya, hogy dezoxiuriduridintrifoszfát (dUTP) jelenlétében gátolja. Ha dUTP-k halmozódnak fel a reakcióelegyben, az gátolhatja a fúziós polimeráz működését. Ezt úgy akadályozzuk meg, hogy az enzim hozzáadása előtt a reakcióelegyet dUTPázzal kezeljük. Jelenleg a fúziós polimeráz dUTP-rezisztens variánsát, Pfu Turbo néven alkalmazzák a fúziós polimeráz helyett a probléma orvoslására.
Mi a Taq Polymerase?
A Taq DNS-polimeráz találmány forradalmasította a molekuláris biológia területét. Megoldotta a DNS-amplifikáció egyik fő problémáját. A Taq DNS-polimeráz egy hőstabil polimeráz enzim, amelyet a termofil Thermus aquaticus baktériumból extrahálnak és izolálnak. Ezen enzimek felfedezése a PCR kialakulásához vezet. Ez az enzim lehetővé tette a polimeráz láncreakció alkalmazását a DNS amplifikálásában a hagyományos fárasztó klónozási technikák helyett. A PCR-t ma molekuláris diagnosztikában, mezőgazdasági és ipari területeken használják, számos új variációval kiegészítve a technikát.
02. ábra: Taq-polimeráz
Taq DNS-polimeráz funkciókat az optimális hőmérséklet-tartomány közötti 72 0 C - 80 0 C-on a Taq DNS-polimeráz igényel egy ko-faktor; magnézium a funkciójához. A Taq-polimeráz nem rendelkezik 3 '- 5' korrektív képességgel, ezért a Taq DNS-polimeráz hibaaránya magasabb, mint az újabb típusú DNS-polimerázok, például a fúziós polimeráz stb. az enzim kényelme és rugalmassága miatt ugyanaz a tudomány világában.
Milyen hasonlóságok vannak a fúzió és a Taq polimeráz között?
- Mind a Phusion, mind a Taq polimeráz enzimek olyan polimerizáló enzimek, amelyek képesek nukleotidokat hozzáadni a DNS szál 3 'szabad végéhez.
- Mind a Phusion, mind a Taq polimerázokhoz primer szekvencia szükséges a polimerizáció megindításához.
- A Phusion és a Taq polimerázok egyaránt hőállóak.
- Mind a Phusion, mind a Taq polimerázt PCR-mechanizmusokban használják a DNS amplifikálására.
- Amikor a polimerázt hozzáadjuk a reakcióelegyhez, mind a Phusion, mind a Taq polimerázokat hozzáadjuk utoljára az enzim hatékonyságának biztosítása érdekében.
- Mind a Phusion, mind a Taq polimerázokat kereskedelmi forgalomban szintetizálják molekuláris biológiai kísérleti célokra.
- Mind a Phusion, mind a Taq polimerázok működéséhez kofaktort igényelnek.
Mi a különbség a fúzió és a Taq polimeráz között?
Különböző cikk a táblázat előtt
Phusion vs Taq Polymerase |
|
| A Phusion egy Pyrococcus furiosusból izolált DNS-polimeráz, amelyet főleg klónozási kísérletek során alkalmaznak a hűség növelése érdekében. | A Taq DNS-polimeráz a polimeráz-láncreakcióban (PCR) használt standard DNS-polimeráz, amelyet a hőstabil baktériumtól, a Thermus aquaticustól izolálnak. |
| Forrásszervezet | |
| A fúziót extrémophil archaea - Pyrococcus furiosus - ból nyerik ki. | Ezek az irodalmi művek a gyarmatosítási periódustól a dekolonizációs időszakig terjednek. |
| Bizonyítékolvasási képesség | |
| 3 '- 5' korrekt olvasási képesség van jelen a Phusionban. | A Taq-polimerázban nincs 3 '- 5' korrekt olvasási képesség. |
| Hűség | |
| Nagy hűség van a Phusion mellett. | A Taq-polimeráz alacsony hűséget mutat. |
| Erősítés | |
| A fúzió képes hosszú DNS-fragmensek amplifikálására. | A Taq-polimeráz sokkal rövidebb DNS-fragmenseket képes amplifikálni. |
| dUTP mérgezés | |
| A fúziós hatást a páratlan akkumuláció gátolja. | A TaUP-polimerázt a dUPT nem gátolja. |
Összegzés - Phusion vs Taq polimeráz
A fúzió és a Taq DNS polimeráz két hőstabil polimeráz, amelyet PCR technikákban alkalmaznak. A fúzió az extrémofilből, a Pyrococcus furiosusból izolált polimeráz, míg a Taq a termostabil Thermus aquaticus baktériumtól. A Taq DNS polimeráz felfedezése a PCR találmányhoz vezet. A fúziónak számos előnye van a Taq-tal szemben, ami a Phusion-t jobbá tette a nagy hűségű DNS előállításában. A PCR-ben azonban továbbra is Taq-polimerázt használnak standard polimeráz-enzimként. Ez a különbség a Phusion és a Taq polimeráz között.
