Különbség A Tompa és A Ragacsos Végződés Között

2024 Szerző: Mildred Bawerman | [email protected]. Utoljára módosítva: 2023-12-16 08:39

Kulcskülönbség - Tompa vs ragadós végösszekötés

A restrikciós endonukleázok olyan specifikus enzimek, amelyek kettősszálú DNS-t (dsDNS) vágnak le. A molekuláris biológia molekuláris ollóként is ismert. A restrikciós enzimek képesek felismerni a felismerési helyként ismert dsDNS specifikus rövid szekvenciáit, és hasítják a foszfodiészter- és hidrogénkötéseket kettős szálak megnyitásához. Ezeknek az enzimeknek a hasítása eredményeként a DNS-fragmensek különböző típusú végekkel, például ragadós és tompa végekkel készülnek. A DNS-ligáz egy olyan enzim, amelyet a molekuláris biológia során két szomszédos DNS-szál új kötések létrehozásával történő összekapcsolására használnak. A lépést ligálásnak nevezzük, és a ligált DNS-típus típusa szerint tompa végi ligálásnak és ragadós végi ligálásnak nevezhetjük őket. A tompa és a ragadós végű ligálás közötti legfontosabb különbség az, hogy a tompa végű ligálás két tompa véget tartalmazó DNS-fragmensek között következik be, míg a ragadós végi ligálás az 5 'és 3' túlnyúlások között történik. A tompa végű ligáláshoz képest a ragadós végi ligálás hatékonyabb és stabilabb.

TARTALOM

1. Áttekintés és kulcsfontosságú különbségek

2. Mi a tompa végű összekapcsolás

3. Mi az a ragacsos végű összekapcsolás

4. Egymás melletti összehasonlítás - Blunt vs Ragadós végű Ligation

5. Összegzés

Mi az a tompa végződés?

Egyes restrikciós endonukleázok képesek elvágni a DNS-t az ellentétes bázisokon, és tompa végű DNS-fragmenseket hozhatnak létre. Ezeket az enzimeket tompa végvágóként ismerjük; egyenesen lefelé hasadnak a restrikciós hely közepéig anélkül, hogy egyszálú, túlnyúló alapokat hagynának. A tompa végeket nem túlnyúló végeknek is nevezik, mivel a végükön nincs 3 'és 5' túlnyúló alap. Mindkét szál tompa végű alappároktól végződik. A tompa végű vágó enzimek az EcoRV HaeIII, AluI és SmaI.

A tompa vég ligálása két tompa vég között történik. Ez nem a kiálló alapok ligálása. Ez a ligálás kevésbé hatékony, mint a ragadós végi ligálás. Bizonyos esetekben azonban a tompa végű ligálás előnyösebb, mint a ragadós végi ligálás, különösen a PCR-termékek ligálásakor. A PCR-termékeket mindig tompa végekkel állítják elő. A tompa végű ligáláshoz nincs szükség komplementer végekre a DNS-ben a ligáláshoz.

01. ábra: Tompa végtermelés Eco RV enzimmel

Mi az a ragacsos végződés?

Egyes restrikciós endonukleázok képesek vágni a dsDNS-t, és a végén egy egyszálú DNS túlnyúló darab marad. Ezeket a végeket ragadós vagy túlnyúló végeknek nevezik. Ragadós végi ligálás két olyan DNS-fragmens között történik, amelyek megfelelő túlnyúlásokat tartalmaznak, mivel a ragadós végek párosítatlan bázisokkal rendelkeznek, és a kötések kialakításához komplementer bázisokra van szükség. Ezért a megfelelő ligáló fragmensek előállításához ugyanazt a restrikciós enzimet kell használni mindkét DNS-forráshoz.

A ragadós végű ligálás hatékonyabb és gyakran nagyon kívánatos a klónozási folyamatokban. Számos restrikciós enzim létezik, amelyek ragadós végeket hoznak létre. Ezek EcoRI, BamHI, HindIII stb.

02. ábra: Ragadós végtermelés Eco RI enzimmel

Mi a különbség a tompa és a ragacsos végződés között?

Különböző cikk a táblázat előtt

Blunt vs Sticky End Ligation
A tompa végű ligálás két tompa végű DNS-fragmens között történik.	Ragadós végi ligálás két illeszkedő, ragacsos végű DNS-fragmens között történik.
Enzimek
A tompa végű vágók tompa végeket hoznak létre.	A ragadós végvágók ragadós vagy összetartó végeket eredményeznek.
Az egyeztetés végének követelménye
Nem igényel illeszkedő fragmenseket vagy komplementer bázisokat.	Alappárok kialakításához a végeken kiegészítő alapokra van szükség.
Hatékonyság
Kevésbé hatékony, mint a ragadós végi ligálás	Hatékonyabb, mint a tompa végű ligálás.

Összegzés - Blunt vs Sticky End Ligation

A restrikciós endonukleázok képesek hasítani a dsDNS-t és különböző végű DNS-fragmenseket termelni. Felismerik a specifikus szekvenciákat és korlátozzák a DNS-t, ragadós és tompa végeket hozva létre. A ragadós végeknek a töredékek végén párosítatlan alapok vannak. A tompa végek az egyenes hasítás miatt jönnek létre, és a végükön alappárok vannak. A ragadós végű ligáláshoz két kiegészítő, egyszálú DNS-darab szükséges. A tompa vég ligálása bármely két tompa vég fragmens között történik. Ez a különbség a tompa és a ragacsos ligálás között.