Kulcskülönbség - Választható Marker vs Reporter Gene
Géntechnikai technikát alkalmaznak a fontos gének szervezetből egy másik szervezetbe történő átvitelére. Az idegen gén beillesztése egy másik szervezet genomjába és expresszálása a gazdasejtben a legnehezebb lépés a génátadás során. A transzformációs folyamat sikerének kimutatásához szelektálható markert és riporter gént használunk a rekombináns molekulában. A szelektálható marker egy DNS-szekvencia vagy gén, amely a transzformált sejteket expresszálja és szelektálja a nem transzformált sejtekből. A riporter gén egy másik gén, amelyet a transzformált sejtek megkülönböztetésére és az inszertált gén gazdaszervezeten belüli működésének számszerűsítésére vagy detektálására használnak. A szelektálható marker és a riporter gén közötti legfontosabb különbség az, hogy a szelektálható markert a nem transzformált sejtek kiszűrésére és a transzformált sejtek jelzésére használják, míg a riporter gént a gazdán belüli génexpresszió szintjének számszerűsítésére használják.
TARTALOM
1. Áttekintés és kulcsfontosságú különbségek
2. Mi a választható jelölő
3. Mi a riporter gén
4. Egymás mellett történő összehasonlítás - választható marker és riporter gén
5. Összegzés
Mi az a választható jelölő?
A géntechnológiában a szóban forgó gént egy megfelelő vektorba inszertáljuk, és gazdaszervezetekké transzformáljuk. A transzformáció azonban csak az illetékes gazdasejtekben sikeres, és lehetőség van arra, hogy a gazdasejtek elutasítsák az idegen DNS felvételét. Ezért fontos a transzformált és nem transzformált sejtek differenciálása a további kísérletezés folytatásához. Ezért a kutatók egy szelektálható markergént beépítenek a vektorba a transzformált sejtek egyszerű transzformálásához a nem transzformált sejtekből. A szelektálható marker egy DNS-szekvencia, különösen egy gén, amely hasznos a transzformált sejtek azonosításához. Ez a marker gén olyan tulajdonságot mutat, amely megfelel a transzformált sejtek mesterséges kiválasztásának a nem transzformált sejtekből egy táptalajon.
A molekuláris biológiában alkalmazott leggyakoribb szelektálható markerek az antibiotikumokkal szemben rezisztens gének. Egy antibiotikum-rezisztencia gént inszertálunk a vektorba, és transzformálunk gazdasejtekké, különösen a gazdabaktériumhoz. Az adott antibiotikum beépül a baktérium tenyészközegébe. A szelektív marker jelenléte miatt szelektív körülmények között csak azok a sejtek tudnak életben maradni, amelyek tartalmazzák a megfelelő szelektálható markert. A nem transzformált sejtek nem képesek növekedni az antibiotikumot tartalmazó közegben. Ezért az antibiotikum-rezisztens szelektálható marker miatt a transzformált sejtek könnyen azonosíthatók.
Az antimetabolitokra, herbicidekre jellemző tulajdonságokat biztosító géneket szelektív markerként alkalmazzák a növényi géntechnológia klónozó vektoraiban. A szelektív markerek géntechnológiával módosított szervezetekké történő átalakulása azonban negatív hatással van a környezetre és az emberre. Az antibiotikum-rezisztens baktériumok felszabadulása növelheti az emberi kórokozók antibiotikum-rezisztenciáját. Szennyezheti a terméket vagy a biomasszát antibiotikumokkal, és elveszítheti a szelektív nyomást az antibiotikumok lebomlása és inaktiválása következtében.
01. ábra: Plazmid vektor génátvitelhez szelektálható markerrel
Mi az a riporter gén?
A riporter gének olyan gének, amelyek lehetővé teszik a beillesztett génexpresszió detektálását vagy mérését. Ezek a riporter gének a kívánt gén szabályozó szekvenciáihoz kapcsolódhatnak, hogy jelezzék az expresszió helyét vagy szintjeit. Ezért a gének ugyanazon promóter alatt történő expressziója alatt egyetlen mRNS-szekvenciává íródnak át, majd fehérjévé alakulnak, amely jelezheti a génexpresszió szintjét.
A riporter gének különböző típusúak, és vizuálisan azonosítható jellemzőket tartalmaznak, amelyek általában részt vesznek a fluoreszcens és lumineszcens fehérjékben. A fluoreszcens fehérjét és enzimeket kódoló gének, a láthatatlan szubsztrátokat lumineszcens vagy színes termékekké alakítják a sikeres génexpresszió jelzésével és a génexpresszió számszerűsítésének lehetőségével.
02. ábra: A riporter gén kifejezése
Mi a különbség a választható marker és a riporter gén között?
Különböző cikk a táblázat előtt
Választható Marker vs Reporter Gene |
|
| A szelektálható marker egyfajta DNS-szekvencia, amely segít megkülönböztetni a transzformált sejteket a nem transzformált sejtekkel. | A riporter gén egy olyan gén, amely segít meghatározni a gazdasejtbe beillesztett kívánt gén expresszióját. |
| A gyártott egységek jellege | |
| A géneket olyan jellemzők kódolják, amelyek segítik a mesterséges szelekciót a növekvő táptalajon. | A géneket vizuálisan azonosítható jellemzőkkel kódolják. |
| Használat | |
| Az antibiotikum rezisztencia gének, antimetabolit gének, herbicid rezisztencia gének stb. | Ilyenek például a zöld fluoreszcens fehérje, a β-glükuronidáz, a klóramfenikol-acetil-transzferáz, a vörös fluoreszcens fehérje stb. |
Összegzés - Választható Marker vs Reporter Gene
A szelektálható markerek lehetővé teszik, hogy a transzformált sejtek bizonyos antibiotikummal vagy herbiciddel adagolt szelektív táptalajban növekedjenek. A transzformált sejtek korai kiválasztásához használják őket. Riporter géneket alkalmazunk a beillesztett kívánt gén expressziójának mennyiségi meghatározására. Lehetővé teszik a transzformált és nem transzformált sejtek differenciálódását is. Ez a különbség a szelektálható marker és a riporter gén között. A szelektálható markert és a riporter gént is fontos markernek tekintik a géntechnológiában.
