Különbség A Klónozás és A Szubklónozás Között

2024 Szerző: Mildred Bawerman | [email protected]. Utoljára módosítva: 2023-12-16 08:39

Fő különbség - klónozás vs szubklónozás

A klónozás és a szubklónozás olyan molekuláris biológiai eljárás, amely genetikailag azonos sejteket vagy organizmusokat hoz létre az érdekes DNS-sel vagy génnel. A klónozás egy olyan technika, amely magában foglalja az érdekelt gén vagy DNS vektorba történő beillesztését, annak replikációját egy gazdabaktériumban, valamint sejtek vagy szervezetek termelését, amelyek a genetikai összetétel pontos másolatai. A szubklónozás olyan technika, amely magában foglalja a kérdéses gén beillesztését, amely már beillesztésre kerül egy vektorba, egy másodlagos vektorba, annak replikációját egy gazda baktériumon belül, és a sejtek vagy organizmusok genetikailag azonos kópiáinak előállítását jelenti. A legfontosabb különbség a klónozás és a szubklónozás között az, hogy a klónozás során a kérdéses gén egy vektorba ligálva folytatja a klónozási folyamatot, míg a szubklónozás sorána már érdeklődő, már érdekelt gént elválasztjuk az anyavektortól, és ismét beillesztjük egy befogadó vektorba, és folytatjuk a folyamatot.

TARTALOM

1. Áttekintés és a legfontosabb különbség

2. Mi a klónozás

3. Mi a szubklónozás

4. Egymás melletti összehasonlítás - Klónozás vs szubklónozás

5. Összefoglalás

Mi a klónozás?

A klónozás az az eljárás, amely genetikailag azonos organizmusokat vagy sejteket állít elő. A természetben a klónozás az ivartalan szaporodás útján történik. Ha nincs genetikai rekombináció vagy változás, a leánysejtek megkapják a szülő azonos genetikai felépítését. A prokarióta és az eukarióta organizmusok klónokat hoznak létre bináris hasadással, rügyképződéssel, mitózissal stb.

A molekuláris klónozás fő célja, hogy milliónyi másolatot készítsen genetikailag azonos sejtekből vagy organizmusokból, amelyek az érdekes DNS-fragmenst hordozzák (főleg gének). Olyan organizmusokat hoz létre, amelyek pontos genetikai másolataival rendelkeznek. Elsősorban specifikus géneket klónoznak molekuláris vizsgálatokban a strukturális és funkcionális információk megszerzése és a DNS-szekvenálás céljából. Szintén specifikus fehérjék vagy termékek nagy mennyiségben történő előállításához széles körben alkalmazzák a klónozást.

Klónozási eljárás

A klónozási eljárás alapvető lépései a következők.

1. A kérdéses gén azonosítása és izolálása. (A kérdéses gén amplifikációja PCR-rel).
2. Az érdekes gén restrikciós emésztése (restrikciós endonukleáz vágja le a gént).
3. A vektor DNS restrikciós emésztése. (A vektor DNS-t szintén ugyanazon restrikciós endonukleáz alkalmazásával vágjuk le).
4. A gén beillesztése a vektorba és a rekombináns molekula képződése.
5. A rekombináns vektor transzformációja gazdabaktériummá.
6. A transzformált baktériumok izolálása és azonosítása (a plazmid vektornak tartalmaznia kell egy szelektálható gént, leggyakrabban egy antibiotikum rezisztencia gént a transzformált baktériumok szkríneléséhez).
7. Rekombináns génexpresszió a gazdán belül.

01. ábra: Klónozási eljárás

Mi a szubklónozás?

A szubklónozás egy eljárás, amely egy érdeklődő gént egyik vektorból egy másik vektorba mozgat, hogy lássa a gén expresszióját a gén kívánt funkcionalitásának elérése érdekében. Ebben a módszerben két vektor vesz részt; mégpedig szülővektor és célvektor. A klónozott inszerteket a szubklónozás során ismét egy második vektorba mozgatjuk. A génnek az első vektorból a második vektorba történő átvitelének célja az, hogy olyasmit nyerjünk, amelyet az első vektor nem tudott megtenni, vagy hogy egy gént ismét szétválasszunk a már klónozott DNS-fragmensen belül, és önmagában kifejezzük. Kezdetben restrikciós enzimeket alkalmaznak ebben az eljárásban.

Szubklónozási eljárás

A szubklónozás alapvető lépései a következők.

1. A restrikciós endonukleázok segítségével az érdeklődő DNS elválasztása a donor plazmidban (szülővektor).
2. A kérdéses DNS amplifikálása PCR alkalmazásával.
3. A PCR-termék (a kívánt DNS) tisztítása gélelektroforézissel.
4. A befogadó plazmid megnyitása ugyanazzal a restrikciós endonukleázzal, amelyet az érdekelt DNS szétválasztására használunk az alap plazmidban.
5. A kívánt DNS (gén) ligálása a befogadó plazmidba a szubklónozott plazmid létrehozásához.
6. A szubklónozott vektor átalakítása kompetens gazda baktériumká.
7. A transzformált sejtek szűrése.
8. A plazmid DNS tisztítása és felhasználás DNS szekvenálására vagy a gének expressziójára a kívánt termékek előállításához.

A szubklónozást olyan esetekben hajtják végre, amikor egy gént izolálnak a klónozott géncsoportból, vagy amikor a kérdéses génnek át kell ülnie egy hasznos plazmidba, hogy lássa a kérdéses gén pontos működését.

02. ábra: Szubklónozási eljárás

Mi a különbség a klónozás és a szubklónozás között?

Különböző cikk a táblázat előtt

Klónozás vs szubklónozás
A klónozás az az eljárás, amely genetikailag azonos organizmusokat vagy sejteket állít elő.	A szubklónozás egy eljárás, amely egy érdeklődő gént egyik vektorból egy másik vektorba mozgat, hogy lássa a gén expresszióját a gén kívánt funkcionalitásának elérése érdekében.
Folyamat
Válasszuk el az érdeklődésre számot tartó DNS-t a szervezettől, majd egyszer helyezzük be egy vektorba és klónozzuk	A már klónozott DNS-t elválasztjuk az első vektortól, beillesztjük egy második vektorba és klónozzuk.
Helyezze be a mozgást a vektorokon keresztül
Nem mozgatja az inszerteket (az érdekes DNS-t) egyik vektorból a másikba.	Helyezze a betéteket a szülő vektorból a cél vektorba.

Összegzés - klónozás vs szubklónozás

A klónozás genetikailag azonos sejteket vagy organizmusokat hoz létre a beillesztett génnel vagy DNS-sel. A kívánt DNS szétválasztásán és vektorba történő beillesztésén, valamint egy gazda baktériumon belüli expresszión keresztül halad. A szubklónozás hasonló lépéseket követ a klónozással. A szubklónozás során azonban a már klónozott DNS-fragmenst (az érdeklődésre számot tartó gént) egy vektorba inszertáljuk és transzformáljuk egy gazda baktériumgá. Ez a legfontosabb különbség a klónozás és a szubklónozás között.