Különbség A Meleg és A Hideg Tripszinezés Között

2024 Szerző: Mildred Bawerman | [email protected]. Utoljára módosítva: 2023-12-16 08:39

Fő különbség - Meleg vs hideg tripszinizálás

A meleg és hideg tripszinizáció két módszer, amelyet állati sejttenyésztésben alkalmaznak a sejtek enzimatikus lebontásában. A meleg és a hideg tripszinizáció közötti fő különbség, ahogy a nevek is sugallják, attól függ, hogy milyen hőmérsékleten adják hozzá a tripszint a sejtek szétbontása céljából. A meleg tripszinizálás magasabb hőmérsékleti körülmények között (36,5 - 37 ⁰ C), míg a hideg tripszinizálás alacsony hőmérsékleten történik.

Az állati sejtek primer sejttenyésztésének folyamata során három fő módszert alkalmaznak, amelyek sikeresnek bizonyultak. A három módszer magában foglalja a sejtek mechanikai szétbontását, a sejtek enzimatikus bontását és az elsődleges explantációs technikát. A sejtek enzimatikus szétdarabolása, amely a sejtek izolálódásához vezet, és ezt a fehérjét lebontó tripszin enzim végzi. Ezért ezt a folyamatot tripszinizációnak nevezik. A tripszinezést két különböző körülmények között végezhetjük, nevezetesen a meleg tripszinezést és a hideg tripszinezést. Meleg tripszinezéssel a módszer kezeljük a sejteket tripszinnel meleg körülmények között hőmérsékleten 36,5-37 ⁰C. A hideg tripszinizálás a tripszin-kezelés folyamata, amely hidegebb körülmények között, előnyösen jégben, nagyon alacsony hőmérsékleten tartva történik.

TARTALOM

1. Áttekintés és kulcsfontosságú különbség

2. Mi a meleg tripszinizálás

3. Mi a hideg tripszinizálás

4. A meleg és a hideg tripszinizálás hasonlóságai

5. Egymás melletti összehasonlítás - Meleg és hideg tripszinizálás táblázatos formában

6. Összefoglalás

Mi a meleg tripszinezés?

A tripszinizálást elvégezhetjük a sejtkomponensek szétbontása érdekében annak érdekében, hogy izoláljuk a sejteket egy primer sejttenyészet előállításához. A tripszin egy fehérjebontó enzim, és a tripszinezéshez használt enzimkeverék lehet nyers kivonat vagy tisztított termék. A nyers kivonatról azt mondják, hogy hatékonyabb a fehérje lízisében és a sejtek szétesésében, mivel más lebontó enzimeket tartalmaz.

A meleg tripszinizáció a leggyakrabban alkalmazott enzimatikus módszer a magasabb hőmérsékleti viszonyok között zajló sejtek szétbontására. A tripszinezéssel történő kezelés előtt a kívánt szövetet apróbb darabokra aprítjuk. Ez megkönnyíti az egyszerű bontási folyamatot. Az apróra vágott szövetet ezután speciális táptalajban mossuk, amely a Dissection Basal Salt táptalaj.

A mosási lépés befejezése után a sejteket lombikba transzformáljuk, amely az aktív enzimet, azaz a tripszint tartalmazza. Mivel ez a technika magában foglalja egy meleg tripszines kezeléssel protokoll, a tripszin helyezzük hőmérsékleten körülbelül 37 ⁰ C-on körülbelül négy órán át.

01. ábra: tripszin

A tartalmat összekeverjük és centrifugálási módszerekkel keverjük a protokoll megkönnyítése és a bontási folyamat felgyorsítása érdekében. Az ajánlott idő elérése után a sejtek a felülúszóból származhatnak. A felülúszóból származó sejteket ezután meghatározott hőmérsékleten és időben inkubáljuk.

Mi a hideg tripszinezés?

A hideg tripszinizálás a másik tripszinizációs típus, amely hideg körülmények között zajlik. Ebben a technikában az apróra vágott és megmosott sejteket üvegbe helyezzük jégre, majd tripszinnel áztatjuk. Az áztatás időtartama sokkal hosszabb - körülbelül 6 - 24 óra.

Befejezése után az áztatás eljárás, a tripszin eltávolítjuk a sejt-lizátumból, és a szövet darabokat tovább inkubáltuk 37 ⁰ C-on 20 - 30 perc. A sejtek szétbontását a szövetkeverék ismételt pipettázásával hozzuk létre. Ez lehetővé teszi a sejtek elszakadását a membrántól és a felülúszóhoz jutást. Miután a sejtek a felülúszóban vannak, inkubálják és a kívánt hőmérsékleten és időtartamon át tenyésztik.

A hideg tripszinezési módszernek számos előnye van

• Magasabb életképes sejtek hozama, mivel a sejtkárosodás minimalizálódik. A sejtkárosodást minimalizáljuk, ha nem használunk centrifugálási lépéseket.
• Nagyon kényelmes módszer.
• Kevésbé fáradságos.

A hideg tripszinizációs módszer legfőbb korlátja, hogy nagy mennyiségeket nem lehet felhasználni egy esetben.

Milyen hasonlóságok vannak a meleg és a hideg tripszinezés között?

• A meleg és a hideg tripszinizációs folyamatok a tripszin enzimet használják a sejtek szétbontására.
• A sejttenyésztési eljárásokban a meleg és a hideg tripszinizációs folyamatokat egyaránt alkalmazzák a sejtek szétbontására.
• A meleg és a hideg tripszinizációs kezelési eljárások során a sejtek a felülúszóból származnak.

Mi a különbség a meleg és a hideg tripszinezés között?

Különböző cikk a táblázat előtt

Meleg vs hideg tripszinizáció
Meleg tripszinezéssel a módszer kezeljük a sejteket tripszinnel meleg körülmények között hőmérsékleten 36,5-37 0.	A hideg tripszinizálás a tripszin-kezelés folyamata, amely hidegebb körülmények között, előnyösen jégben, nagyon alacsony hőmérsékleten tartva történik.
Jegyzőkönyv
A felaprított szövetet darabokat tartjuk 37 0 C-on folyamatosan az egész eljárás során.	A felaprított szövetet darabokat először tartjuk jéghideg hőmérsékleten, majd a hőmérsékletet 37 0.
Hőfok
A meleg tripszinizáció 36,5-37 0-nál történik	A hideg tripszinizáció jéghideg hőmérsékleten történik.
Elfogyasztott idő
Kevesebb idő szükséges a meleg tripszinezés teljes folyamatához (kb. 4 óra).	Hosszabb idő (kb. 6 - 24 óra) szükséges a hideg tripszinezéshez.
Az életképes sejtek hozama
Alacsony a meleg tripszinizáció.	Magas hideg tripszinizáció.
Centrifugálás alkalmazása
Centrifugálásra van szükség a sejtek meleg tripszinizálásakor történő szétbontásához.	Hideg tripszinezésnél nincs szükség centrifugálásra.
Kezdeti szövetmennyiség a tripszinezéshez
Nagyobb mennyiségű szövet használható a meleg tripszinezéshez.	A hideg tripszinezésnél kisebb mennyiségű szövet használható.
Sejtkárosodás
Meleg tripszinizálásban végzett centrifugálás miatt magas.	Kevesebb a hideg tripszinezés miatt.

Összegzés - Meleg vs hideg tripszinezés

A tripszinizáció a fehérjebontó tripszin enzim alkalmazásának módszere az elsődleges sejttenyészetek szétbontására és előállítására a sejttenyésztési folyamat során. A tripszinezésnek két fő technikája van az eljárás során alkalmazott hőmérsékletek alapján. Meleg és hideg tripszinizáció. Meleg tripszinezéssel végezzük 37 ⁰ C-on, míg a hideg tripszinezéssel végezzük jeges hideg körülmények között. Noha a hideg tripszinizálás hosszabb ideig tart, a teljes életképességről azt mondják, hogy nagyobb az életképes sejtek hozama. Ennek oka az a tény, hogy a hideg tripszinezés során a sejtek károsodása minimálisra csökken, mivel nem alkalmaznak erőteljes centrifugálási lépéseket. Ez a különbség a meleg és a hideg tripszinezés között.