Fő különbség - Meleg vs hideg tripszinizálás
A meleg és hideg tripszinizáció két módszer, amelyet állati sejttenyésztésben alkalmaznak a sejtek enzimatikus lebontásában. A meleg és a hideg tripszinizáció közötti fő különbség, ahogy a nevek is sugallják, attól függ, hogy milyen hőmérsékleten adják hozzá a tripszint a sejtek szétbontása céljából. A meleg tripszinizálás magasabb hőmérsékleti körülmények között (36,5 - 37 0 C), míg a hideg tripszinizálás alacsony hőmérsékleten történik.
Az állati sejtek primer sejttenyésztésének folyamata során három fő módszert alkalmaznak, amelyek sikeresnek bizonyultak. A három módszer magában foglalja a sejtek mechanikai szétbontását, a sejtek enzimatikus bontását és az elsődleges explantációs technikát. A sejtek enzimatikus szétdarabolása, amely a sejtek izolálódásához vezet, és ezt a fehérjét lebontó tripszin enzim végzi. Ezért ezt a folyamatot tripszinizációnak nevezik. A tripszinezést két különböző körülmények között végezhetjük, nevezetesen a meleg tripszinezést és a hideg tripszinezést. Meleg tripszinezéssel a módszer kezeljük a sejteket tripszinnel meleg körülmények között hőmérsékleten 36,5-37 0C. A hideg tripszinizálás a tripszin-kezelés folyamata, amely hidegebb körülmények között, előnyösen jégben, nagyon alacsony hőmérsékleten tartva történik.
TARTALOM
1. Áttekintés és kulcsfontosságú különbség
2. Mi a meleg tripszinizálás
3. Mi a hideg tripszinizálás
4. A meleg és a hideg tripszinizálás hasonlóságai
5. Egymás melletti összehasonlítás - Meleg és hideg tripszinizálás táblázatos formában
6. Összefoglalás
Mi a meleg tripszinezés?
A tripszinizálást elvégezhetjük a sejtkomponensek szétbontása érdekében annak érdekében, hogy izoláljuk a sejteket egy primer sejttenyészet előállításához. A tripszin egy fehérjebontó enzim, és a tripszinezéshez használt enzimkeverék lehet nyers kivonat vagy tisztított termék. A nyers kivonatról azt mondják, hogy hatékonyabb a fehérje lízisében és a sejtek szétesésében, mivel más lebontó enzimeket tartalmaz.
A meleg tripszinizáció a leggyakrabban alkalmazott enzimatikus módszer a magasabb hőmérsékleti viszonyok között zajló sejtek szétbontására. A tripszinezéssel történő kezelés előtt a kívánt szövetet apróbb darabokra aprítjuk. Ez megkönnyíti az egyszerű bontási folyamatot. Az apróra vágott szövetet ezután speciális táptalajban mossuk, amely a Dissection Basal Salt táptalaj.
A mosási lépés befejezése után a sejteket lombikba transzformáljuk, amely az aktív enzimet, azaz a tripszint tartalmazza. Mivel ez a technika magában foglalja egy meleg tripszines kezeléssel protokoll, a tripszin helyezzük hőmérsékleten körülbelül 37 0 C-on körülbelül négy órán át.
01. ábra: tripszin
A tartalmat összekeverjük és centrifugálási módszerekkel keverjük a protokoll megkönnyítése és a bontási folyamat felgyorsítása érdekében. Az ajánlott idő elérése után a sejtek a felülúszóból származhatnak. A felülúszóból származó sejteket ezután meghatározott hőmérsékleten és időben inkubáljuk.
Mi a hideg tripszinezés?
A hideg tripszinizálás a másik tripszinizációs típus, amely hideg körülmények között zajlik. Ebben a technikában az apróra vágott és megmosott sejteket üvegbe helyezzük jégre, majd tripszinnel áztatjuk. Az áztatás időtartama sokkal hosszabb - körülbelül 6 - 24 óra.
Befejezése után az áztatás eljárás, a tripszin eltávolítjuk a sejt-lizátumból, és a szövet darabokat tovább inkubáltuk 37 0 C-on 20 - 30 perc. A sejtek szétbontását a szövetkeverék ismételt pipettázásával hozzuk létre. Ez lehetővé teszi a sejtek elszakadását a membrántól és a felülúszóhoz jutást. Miután a sejtek a felülúszóban vannak, inkubálják és a kívánt hőmérsékleten és időtartamon át tenyésztik.
A hideg tripszinezési módszernek számos előnye van
- Magasabb életképes sejtek hozama, mivel a sejtkárosodás minimalizálódik. A sejtkárosodást minimalizáljuk, ha nem használunk centrifugálási lépéseket.
- Nagyon kényelmes módszer.
- Kevésbé fáradságos.
A hideg tripszinizációs módszer legfőbb korlátja, hogy nagy mennyiségeket nem lehet felhasználni egy esetben.
Milyen hasonlóságok vannak a meleg és a hideg tripszinezés között?
- A meleg és a hideg tripszinizációs folyamatok a tripszin enzimet használják a sejtek szétbontására.
- A sejttenyésztési eljárásokban a meleg és a hideg tripszinizációs folyamatokat egyaránt alkalmazzák a sejtek szétbontására.
- A meleg és a hideg tripszinizációs kezelési eljárások során a sejtek a felülúszóból származnak.
Mi a különbség a meleg és a hideg tripszinezés között?
Különböző cikk a táblázat előtt
Meleg vs hideg tripszinizáció |
|
| Meleg tripszinezéssel a módszer kezeljük a sejteket tripszinnel meleg körülmények között hőmérsékleten 36,5-37 0. | A hideg tripszinizálás a tripszin-kezelés folyamata, amely hidegebb körülmények között, előnyösen jégben, nagyon alacsony hőmérsékleten tartva történik. |
| Jegyzőkönyv | |
| A felaprított szövetet darabokat tartjuk 37 0 C-on folyamatosan az egész eljárás során. | A felaprított szövetet darabokat először tartjuk jéghideg hőmérsékleten, majd a hőmérsékletet 37 0. |
| Hőfok | |
| A meleg tripszinizáció 36,5-37 0-nál történik | A hideg tripszinizáció jéghideg hőmérsékleten történik. |
| Elfogyasztott idő | |
| Kevesebb idő szükséges a meleg tripszinezés teljes folyamatához (kb. 4 óra). | Hosszabb idő (kb. 6 - 24 óra) szükséges a hideg tripszinezéshez. |
| Az életképes sejtek hozama | |
| Alacsony a meleg tripszinizáció. | Magas hideg tripszinizáció. |
| Centrifugálás alkalmazása | |
| Centrifugálásra van szükség a sejtek meleg tripszinizálásakor történő szétbontásához. | Hideg tripszinezésnél nincs szükség centrifugálásra. |
| Kezdeti szövetmennyiség a tripszinezéshez | |
| Nagyobb mennyiségű szövet használható a meleg tripszinezéshez. | A hideg tripszinezésnél kisebb mennyiségű szövet használható. |
| Sejtkárosodás | |
| Meleg tripszinizálásban végzett centrifugálás miatt magas. | Kevesebb a hideg tripszinezés miatt. |
Összegzés - Meleg vs hideg tripszinezés
A tripszinizáció a fehérjebontó tripszin enzim alkalmazásának módszere az elsődleges sejttenyészetek szétbontására és előállítására a sejttenyésztési folyamat során. A tripszinezésnek két fő technikája van az eljárás során alkalmazott hőmérsékletek alapján. Meleg és hideg tripszinizáció. Meleg tripszinezéssel végezzük 37 0 C-on, míg a hideg tripszinezéssel végezzük jeges hideg körülmények között. Noha a hideg tripszinizálás hosszabb ideig tart, a teljes életképességről azt mondják, hogy nagyobb az életképes sejtek hozama. Ennek oka az a tény, hogy a hideg tripszinezés során a sejtek károsodása minimálisra csökken, mivel nem alkalmaznak erőteljes centrifugálási lépéseket. Ez a különbség a meleg és a hideg tripszinezés között.
