Fő különbség - DNS és RNS kivonás
A DNS és az RNS vizsgálata létfontosságú szempont a molekuláris biológia, a biotechnológia és a genetika alapfogalmainak megértése érdekében. Tiszta DNS- és RNS-minták kivonására van szükség a kísérleti eljárások elvégzéséhez e vizsgálatok során. A legfontosabb különbség a DNS és az RNS extrakció között az, hogy a DNS extrakciós folyamat tisztítja a DNS-t, míg az RNS extrakció az RNS-t. A DNS-kivonási folyamatnak három különböző lépése van: a sejtek lízise és a membrán lipidjeinek és fehérjéinek katabolizálása, a katabolitok tömény sóoldattal való összecsomósítása és a DNS etanollal történő kicsapása. A háromlépéses eljárás két opcionális lépésből állhat. Az RNS tisztítási eljárás négy különböző lépésből áll: guanidium-tiocianát hozzáadása a sejtek líziséhez, fehérje denaturálás, beleértve a ribonukleázokat,az RNS elválasztása kloroform és fenol hozzáadásával, és a csapadék etanolos mosása.
TARTALOM
1. Áttekintés és kulcsfontosságú különbség
2. Mi a DNS-extrakció
3. Mi az RNS-extrakció
4. A DNS és az RNS-extrakció hasonlóságai
5. Egymás melletti összehasonlítás - DNS vs RNS-extrakció táblázatos formában
6. Összefoglalás
Mi a DNS-kivonás?
A DNS-extrakció egy fizikai és kémiai folyamat, amelyet a DNS mintából történő tisztítására használnak. A DNS-kivonás fontos szempont a molekuláris biológia és az igazságügyi tudományok összefüggésében. A folyamat három alapvető lépésből áll. Kezdetben meg kell szerezni az érdekes sejteket. Ezután megkönnyítik a sejtek lízisét a sejtmembrán megtörése érdekében, amely megnyitja a sejtet, és a DNS mellett a citoplazmát is kiteszi. Felületaktív anyagokat vagy más detergenseket lehet használni a lipidek lizálásához a sejtmembránból, miközben a jelenlévő fehérjéket proteázok katabolizálják. Ez egy választható lépés. A sejt lízise után a katabolizált molekulák összecsomósodását koncentrált sóoldatok segítik elő. Ezt követi az oldat centrifugálása, amely elválasztja a törmelékcsomókat a DNS-től. Ebben a szakaszbana differenciált DNS-t összekeverjük a sejtciklus során alkalmazott reagensekkel és sókkal.
01. ábra: DNS-kivonás
További tisztítása érdekében a következő lépéseket lehet alkalmazni. Az egyik módszer az etanolos kicsapás, amely magában foglalja a jéghideg etanol és az elválasztott DNS-minta keverését. A DNS oldhatatlan alkoholban, és ezáltal pelletet termel a DNS-molekulák együttes aggregációja miatt. Ebben a folyamatban nátrium-acetátot adnak a kicsapódás fokozásához az ionerősség növelésével. Az etanolos kicsapási folyamat mellett fenol-kloroformos extrakciós folyamat is indukálható ehhez. Ebben a módszerben a fenol denaturálja a mintában jelenlévő fehérjéket. A centrifugálás után a denaturált fehérjék a szerves fázisban maradnak, míg a kloroformmal kevert DNS-molekulák a vizes fázisban vannak. A kloroform eltávolítja a fenolmaradékokat. Miután az extrakció befejeződött,A DNS-t TE pufferben vagy ultratiszta vízben oldva tartjuk.
Mi az RNS extrakció?
Az RNS tisztítása olyan eljárás, amelynek során az RNS-t biológiai mintából tisztítják. A sejtekben és szövetekben ribonukleáz jelenléte miatt ez a folyamat bonyolult. A ribonukleáz enzim képes az RNS gyors lebontására. A ribonukleázok kémiai jellege rendkívül stabil, és nehéz inaktiválni őket. A ribonukleázok semlegesítése egy lehetőség. Mivel ez az enzim mindenütt jelen van a sejtekben és a szövetekben, speciális technikákat dolgoznak ki az RNS kivonására. A sok módszer közül a közös módszer a guanidinium-tiocinát-fenol-kloroformos extrakció.
02. ábra: RNS extrakció
A guanidinium-tiocinát-fenol-kloroformos extrakciós módszer a centrifugálástól és a fáziselválasztástól függ. A centrifugálandó keverék vizes mintából és vízzel telített oldatból áll, amely fenolból és kloroformból áll. Centrifugálás után az oldat egy felső vizes fázisból és egy alsó szerves fázisból áll semleges pH-körülmények között (pH 7-8). Az RNS a vizes fázisban van jelen. A szerves fázis jellemzően fenolban oldott fehérjékből és kloroformban oldott lipidekből áll. Kaotróp ágenst (olyan molekulát adnak hozzá, amely képes megszakítani a vízmolekulák közötti hidrogénkötéseket); ez guanidinium-tiocianát néven ismert. Ez a szer képes denaturálni azokat a fehérjéket, amelyek ribonukleázokat tartalmaznak, amelyek lebontják az RNS-t és részt vesznek a sejtek lízisében. Ezenkívül elválasztja az rRNS-t a riboszomális fehérjéktől. Az RNS-tisztítás utolsó lépése a vizes fázis kicsapásának etanollal történő mosása. Az RNS folyékony nitrogén alkalmazásával is tisztítható.
Milyen hasonlóságok vannak a DNS és az RNS kivonása között?
- Mindkét extrakciós eljárás káros vegyi anyagokat, például fenolt és kloroformot használ.
- A centrifugálás mindkét folyamat elengedhetetlen technikája.
- Etanolt használnak a csapadék mosására és tisztított DNS vagy RNS előállítására.
Mi a különbség a DNS és az RNS kivonása között?
Különböző cikk a táblázat előtt
DNS vs RNS extrakció |
|
| A DNS-kivonás olyan folyamat, amely kivonja a DNS-t egy szervezetből vagy mintából. | Az RNS extrakció olyan eljárás, amely az RNS-t kivonja egy mintából. |
| Lépések | |
| A DNS-kivonási folyamat három különböző lépésből áll, két opcionális lépéssel. | Az RNS kivonási folyamat négy különböző lépésből áll. |
| Reagensek | |
| Felületaktív anyagokat, proteázokat (adott esetben), alkoholt, kloroformot, fenolt, nátrium-acetátot használnak a DNS-ek extrahálásához. | Az RNS extrahálásához guanidium-tiocianátot, kloroformot, fenolt és etanolt használunk. |
Összegzés - DNS vs RNS kivonás
A DNS és az RNS kivonása a molekuláris biológia, a genetika és a biotechnológia tanulmányozásához szükséges kísérleti eljárások létfontosságú eleme. Mindkét eljárás hasonló reagenseket tartalmaz, de az RNS extrakciója egy speciális, a guanidium-tiocianát néven ismert reagens felhasználásával csökkenti a ribonukleázok aktivitását. Ez a fő különbség a DNS és az RNS kivonása között.
A DNS vs RNS extrakció PDF verziójának letöltése
A cikk PDF-verzióját letöltheti, és offline célokra is használhatja, az idézési megjegyzés szerint. Kérjük, töltse le itt a PDF verziót. Különbség a DNS és az RNS kivonása között
