Kulcskülönbség - Közvetlen vagy közvetett ELISA
Az enzimhez kapcsolt immunvizsgálat (ELISA), más néven enzim immunvizsgálat, egy szerológiai teszt, amely kimutatja a vérben lévő antitesteket. Diagnosztikai eszközként használják annak kiderítésére, hogy a páciens egy bizonyos típusú vírusnak vagy más fertőző ágensnek (antigénnek) volt-e kitéve, és a szervezet termelt-e antitesteket a fertőzés ellen. Az ELISA a múltbeli és a jelenlegi fertőzéseket is képes azonosítani. Ezért az ELISA-t gyakran használják előzetes szűrővizsgálatként az orvosok a betegségek mélyreható elemzése előtt. Ezt a vizsgálatot a laboratóriumban úgy lehet elvégezni, hogy vérmintát vesznek a betegtől. Az ELISA tesztnek két típusa van: közvetlen ELISA és közvetett ELISA. A közvetlen és a közvetett ELISA közötti legfontosabb különbség az, hogy a közvetett ELISA érzékenyebb és szekunder antitest hozzáadását igényli, míg a közvetlen ELISA kevésbé érzékeny és csak primer antitestet használ.
TARTALOM
1. Áttekintés és kulcsfontosságú különbségek
2. Mi a közvetlen ELISA
3. Mi az indirekt ELISA
4. Egymás melletti összehasonlítás - Közvetlen vagy közvetett ELISA
5. Összegzés
Mi a közvetlen ELISA?
Az ELISA egy betegség diagnosztikai teszt, amelyet bizonyos antigének vagy antitestek vérben való jelenlétének azonosítására végeznek. Tányérvizsgálatként végezzük. Könnyen meghatározható enzimekhez kapcsolt antitesteket használ. Az antigének jelenléte a szérummintában specifikus, enzimekhez kapcsolt antitestekkel kötődik. Az utolsó lépésben egy specifikus szubsztrátot adunk hozzá, hogy reagáljon az enzimmel. Az enzim átalakítja a szubsztrátot színes vagy szignáltermelő termékké. A kémiai szubsztrát színváltozása egy adott antitest jelenlétét tárja fel a szérum mintában. A közvetlen ELISA teszt csak az enzimhez kapcsolt primer antitestet használ. Az antigénhez kötődve gyorsan megváltoztatja a színét, jelezve a fertőző ágens jelenlétét a vérben. Azonban,a jelek intenzitása gyengébb a közvetlen ELISA-ban, mivel az epitópok az antigének megkötésére korlátozódnak. Ezért a közvetlen ELISA kevésbé érzékeny a közvetett ELISA-hoz képest.
01. ábra: Közvetlen ELISA teszt
Mi az a közvetett ELISA?
Az ELISA-t kétféle antitest alkalmazásával hajthatjuk végre, nevezetesen; primer antitest és szekunder antitest. Az indirekt ELISA eszköz mindkét típusú antitestet használja a jelek amplifikálására a jobb detektálás érdekében. Az indirekt ELISA technikát az alábbiak szerint hajtjuk végre.
- A lemezeket antigénekkel inkubáljuk, és mossuk, hogy blokkoljuk a nem specifikus kötődést.
- Ezután primer antitesteket adunk hozzá és mossuk.
- Enzimhez kapcsolt szekunder antitestet adunk hozzá és mossuk.
- Szubsztrátot adunk hozzá, és hagyjuk reagálni az enzimekkel.
- Jeleket detektálunk, és azonosítjuk a mintában lévő specifikus antigén jelenlétét vagy hiányát.
Közvetett ELISA-tesztben több másodlagos antitest is képes megkötni egyetlen primer antitestet. A másodlagos antitestek könnyen meghatározható enzimekhez kapcsolódnak. Ezért egy kötés egynél több interakció miatt erős jelet adhat. Ezért a közvetett ELISA érzékenyebb, mint a közvetlen ELISA. A közvetett ELISA azonban nem specifikus jeleket képes előállítani a szekunder antitestek keresztreakciói miatt.
02. ábra: Indirekt ELISA teszt
Mi a különbség a közvetlen és az indirekt ELISA között?
Különböző cikk a táblázat előtt
Közvetlen vagy közvetett ELISA |
|
| A közvetlen ELISA kevésbé érzékeny a közvetett ELISA-hoz képest. | A közvetett ELISA érzékenyebb. |
| Eltelt idő | |
| A közvetlen ELISA teszt gyors folyamat. | A közvetett ELISA időigényes. |
| Antitestek használata | |
| A közvetlen ELISA-ban csak egy típusú antitestet (primer antitesteket) használnak. | A közvetett ELISA-hoz primer és szekunder antitesteket használnak. |
| Kapcsolat az enzimekkel | |
| Az elsődleges antitestek enzimekhez kapcsolódnak. | A másodlagos antitestek kapcsolódnak az enzimekhez. |
| A második antitestek keresztreaktivitása | |
| A közvetlen ELISA kiküszöböli a második antitestek keresztreakcióját. | A közvetett ELISA-t a második antitestek keresztreakciója befolyásolja. |
| Jelek | |
| A jelek gyengék a közvetett ELISA-hoz képest. | A jeleket közvetett ELISA-val erősítik. Ezért könnyen felismerhető. |
Összegzés - Közvetlen vagy közvetett ELISA
Az ELISA egy biokémiai technika, amelyet főleg az immunológiában alkalmaznak antitest vagy antigén jelenlétének kimutatására a beteg vérmintájában. Két, közvetlen vagy közvetett ELISA néven ismert eljárással hajtható végre. A közvetlen ELISA-teszt csak primer antitesteket használ az antigén kimutatására, míg a közvetett ELISA primer és szekunder antitesteket egyaránt használ. A közvetlen ELISA-ban az elsődleges antitesteket, míg a közvetett ELISA-ban a szekunder antitesteket jelölik. Ez a különbség a közvetlen és a közvetett ELISA között.
